齐墩果酸诱导多种小鼠胚胎干细胞向生殖细胞方向分化研究-世界中医药.PDFVIP

·２３２· ＷＯＲＬＤＣＨＩＮＥＳＥＭＥＤＩＣＩＮＥ　Ｆｅｂｒｕａｒｙ．２０１５，Ｖｏｌ．１０，Ｎｏ．２ 齐墩果酸诱导多种小鼠胚胎干细胞向生殖 细胞方向分化研究 １，２ ２，３ ４ １，２ 万　谦 　姚奏英 　伍林涛　陆　华 （１成都中医药大学第二附属医院，成都，６１００４１；２四川省计划生育研究所，成都，６１００４１；３成都中医药大学临床医学院， 成都，６１００７５；４贵州省油菜研究所，贵阳，５５０００８） 摘要　目的：寻找一种能诱导多种胚胎干细胞向生殖细胞方向分化的化合物，并以常用的诱导物维甲酸（ＲｅｔｉｎｏｉｃＡｃｉｄ， ＲＡ）作为阳性参照物。方法：分别培养小鼠胚胎干细胞１Ｂ１０、Ｄ３、Ｒ１／Ｅ，诱导它们形成拟胚体，让拟胚体贴壁生长，加入特 定化合物诱导贴壁细胞分化，诱导７２ｈ后，提取被诱导细胞的ＲＮＡ，再合成ｃＤＮＡ，最后利用实时荧光定量ＰＣＲ检测各被 诱导细胞中与生殖分化相关的基因的表达水平的变化。结果：发现齐墩果酸（ＯｌｅａｎｏｌｉｃＡｃｉｄ，ＯＡ）显著上调了所有被研究 的小鼠胚胎干细胞的生殖分化关键基因的表达水平，同时发现阳性参照物ＲＡ仅能诱导１Ｂ１０、Ｒ１／Ｅ，而不能诱导Ｄ３向生 殖细胞方向分化。结论：ＯＡ能诱导多种胚胎干细胞向生殖细胞方向分化，诱导能力方面具有比常用诱导物维甲酸更广泛 的普遍性。 关键词　齐墩果酸；小鼠胚胎干细胞；体外分化诱导物；生殖方向分化 ＳｔｕｄｙｏｎＯｌｅａｎｏｌｉｃＡｃｉｄＩｎｄｕｃｉｎｇＳｅｖｅｒａｌＳｔｒａｉｎｓｏｆＭｏｕｓｅＥｍｂｒｙｏｎｉｃＳｔｅｍＣｅｌｌｓｔｏＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｔｏｗａｒｄｓＧｅｒｍＣｅｌｌｓ １，２ ２，３ ４ １，２ ＷａｎＱｉａｎ ，ＹａｏＺｏｕｙｉｎｇ ，ＷｕＬｉｎｔａｏ，ＬｕＨｕａ （１ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｅｎｇｄｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００４１，Ｃｈｉｎａ；２Ｓｉｃｈｕａｎ ＦａｍｉｌｙＰｌａｎｎｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００４１，Ｃｈｉｎａ；３ＴｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｅｎｇｄｕ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００７５，Ｃｈｉｎａ；４ＧｕｉｚｈｏｕＲａｐｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００８，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｆｉｎｄａｎａｇｅｎｔｗｈｉｃｈｃａｎｉｎｄｕｃｅｓｅｖｅｒａｌｓｔｒａｉｎｓｏｆｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｔｏｗａｒｄｓｇｅｒｍ ｃｅｌｌｓ，ｗｉｔｈｔｈｅｃｏｍｍｏｎｉｎｄｕｃｅｒｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ（ＲＡ）ａｓｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔｒａｉｎｓｏｆｍｏｕｓｅｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓ （ｍＥＳＣ）１Ｂ１０，Ｄ３，Ｒ１／Ｅｗｅｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｃｕｌｔｕｒｅｄ，ａｎｄｉｎｄｕｃｅｄｔｏｆｏｒｍｅｍｂｒｙｏｉｄｂｏｄｉｅｓ（ＥＢｓ）ｗｈｉｃｈｗｅｒｅａｌｌｏｗｅｄｔｏａｔｔａｃｈ； ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅｔｈｅｎａｄｄｅｄｔｏｉｎｔｅｒｖｅｎｅｔｈｅａｔｔａｃｈｅｄｃｅｌｌｓ；ｔｈｅｉｎｔｅｒｖｅｎｅｃｏｎｔｉｎｕｅｄｆｏｒ７２ｈａｎｄＲＮＡｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄａｎｄ ｃＤＮＡｗｅｒｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ；ｆｉｎａｌｌｙ，ｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲ（ｑＰＣＲ）ａｓｓａｙｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐａｔｔｅｒｎｓｏｆ１１ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｒｅｌａｔｅｄｇ