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《生物工艺原理》考试总结 重庆理工大学 药学与生物工程学院 制药工程 11级202班 周伟 发酵工程的特点：1、常温常压，2、原料简单粗放，3、反应专一性强，4、反应必须在无菌条件下进行，5、由于生物体本身所具有的反应机制，能够专一性地和高度选择性地对某些较为复杂的化合物进行特定部位地氧化、还原等化学转化反应，也可以产生比较复杂的高分子化合物，6、微生物菌种是进行发酵的根本因素，7、经济效益显著 微生物工业对菌种的要求：1、原料廉价、生长迅速、目标产物产量高 2、易于控制培养条件，酶活性高，发酵周期较短 3、抗杂菌和噬菌体的能力强 4、菌种遗传性能稳定，不易变异和退化 5、满足代谢控制的要求 6、安全性（不是病原菌，不产毒素） 7、对需添加的前体物质有耐受能力，并不把之作为碳源分解 菌种退化的原因：1、基因自发突变：变异菌株性状分离；连续传代（回复突变） 2、菌种保藏不当 3、菌种生长的条件没有得到满足 防止菌种退化的措施：1、菌种的分离 2、菌种的复壮 3、提供良好的环境条件 4、用优良的保藏方法 5、定期纯化菌种 菌种的保藏原理：根据菌种的生理、生化特性，人工创造条件噬菌体的代谢活动处于休眠状态 方法：1、斜面低温保藏法 2、石蜡油封保藏法 3、沙土管保藏法 4、冷冻干燥法 5、液氮超低温保藏法 菌种的选育步骤：采样，增殖培养，分离纯化，初筛，复筛，性能鉴定 分离性延迟：经诱变处理后，细胞中的基因处于不纯的状态，突变型基因由于属于隐性基因而暂时得不到表达，需要经复制、分离，在细胞中处于纯的状态时，其性状才能得以表达 生理性延迟：突变基因由杂合状态变为纯合状态时，还不一定表现突变表型，新的表型必须等到原有基因的产物稀释到某一程度后才能表达出来 后培养：将诱变处理过的细胞在营养丰富的培养基中进行培养，使突变基因的稳定、纯合并表达 后培养目的：解除突变的表型延迟 出发菌株的选择：1、有一定的目标产物的生产能力 2、生长繁殖快、营养要求低、产孢子多且早 3、对诱变剂敏感，变异幅度大 4、要尽量选择单倍体细胞、单核或核少的多细胞体来作出发诱变细胞 营养缺陷型：丧失了合成一种或多种必需生长因子能力的菌株，他们只能在补充了相应生长因子的培养基上才能正常生长 渗漏缺陷型：遗传性障碍不完全的营养缺陷型，突变使某一种酶的活性下降而不是完全丧失 基因工程的基本步骤：1、分离或合成基因 2、通过体外重组将基因插入载体 3、将重组DNA导入细胞 4、扩增克隆基因 5、筛选目的基因 种子罐计数：指制备种子需逐级扩大培养的次数 种龄：种子的培养时间 接种量：移入的种子液体积和接种后培养液体积的比例 培养基的配置原则：1、营养物质满足微生物需要 2、营养物质浓度适宜 3、物理化学条件适宜 4、考虑培养目的 培养基成分选择原则：1、碳氮源相互配合，发挥各自优势，避其所短 2、注意生理酸、生理碱和PH缓冲剂的加入和搭配 3、合适的碳氮比 生理酸：经微生物代谢后形成酸性物质的无机氮源 生理碱：经微生物代谢后形成碱性物质的无机氮源 前体物质：某些化合物加入到发酵培养基中，能直接被微生物在生物合成过程结合到产物分子中去，而其自身结构并没有多大变化，但产物的量却因加入而有较大的提高 抑制剂：抑制某些代谢途径的进行，使另一代谢途径活跃 促进剂：在氨基酸、抗生素和酶制剂发酵生产过程中，对发酵起一定促进作用的物质 复合反应：在酸和热的作用下，部分葡萄糖经1.6键结合成龙胆二糖、异麦芽糖和其他低聚糖 分解反应：葡萄糖分解为羟甲基糠醛、有机酸和有色物质等非糖物质 液化：利用a-淀粉酶淀粉液化转化为糊精及低聚糖，使淀粉的可溶性增加 糊化：指淀粉受热后，淀粉颗粒膨胀，晶体结构消失，互相接触变成糊状液体 糖化：利用糖化酶将淀粉液化产物胡静及低聚糖进一步水解成葡萄糖的过程 老化：分子间氢键已断裂的糊化淀粉又重新排列形成新的氢键的过程 灭菌：只利用物理和化学方法杀灭或除去原料及设备中一切生命物质的过程 消毒：用物理或化学的方法杀死物料、容器、器具内外的病源微生物 灭菌与消毒区别：消毒不一定达到灭菌的要求，而灭菌则可达到消毒的目的 致死温度：杀死微生物的极限温度称为致死温度 致死时间：杀死全部微生物所需的时间成为致死时间 高温瞬时灭菌原理：在热灭菌过程中，同时发生微生物死亡和培养基成分破坏两个过程。温度均能加速其过程进行的速率，当温度升高时，微生物死亡的速率更快，所以采用较高的温度，较短的灭菌时间，以减少营养成分的破坏 连消：将配置好的培养基在通入发酵罐时进行加热、保温、降温的灭菌过程，即连续灭菌 实消;将配置好的培养基放入发酵罐或其他装置中，通入蒸汽，培养基和所用设备一起灭菌的过程，即间歇灭菌 空气净化的流程图见书P102 图4-4 空气过滤除菌原理：1、布朗扩散