微生物工程复习题自己整理的山东.docVIP

第一章 1、微生物工程中的常用菌株 黑曲霉 Aspergillus niger 柠檬酸 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 制曲 啤酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 野油菜黄单胞菌 x.campestris 黄原胶 2、分离与筛选菌种的一般步骤 四个步骤 样品采集 增值培养 纯种分离 生产性能测定 3、四个圈儿 生长圈儿法 具体操作步骤：将待测物质缺陷型菌株与不含待测物质的琼脂混合到平板，再涂布上待检菌株，若能产生待测物质，则在该菌株的周围会产生浑浊的生长圈儿 原理 ：将带检菌涂布于高浓度工具菌并缺少所需营养物的平板上进行培养，若该菌株能合成平板所需的营养物质，在该菌株的菌落周围会形成一个浑浊的生长圈儿。 抑菌圈儿 同上 4、抗肿瘤药物产生菌的分离 生化诱导分析法 5、菌种选育的方法 自然选育 诱变育种 杂交育种 原生质体融合育种 基因工程育种 诱变育种中 常用诱变剂中 氮芥引起染色体畸变 亚硝酸引起碱基的脱氨基 亚硝基胍引起营养缺陷型突变 紫外线的诱变机制是形成胸腺嘧啶二聚体以改变DNA的生物活性，造成菌体变异甚至死亡。 后培养的意义：遗传物质经诱变处理后发生的突变，必须经过复制才能表现出来 研究表明，诱变后的一小时内必须进行新的蛋白的合成，这个变异才有效 因此必须在完全培养基中进行培养才能稳定变异，使菌株表现出高的突变频率。 6、抗反馈调节突变株的筛选常选择 产物的结构类似物 组成型菌株的筛选 设计某种有利于组成型菌株生长，，并限制诱导性菌株生长的培养条件，造成组成型菌株生长优势和适当的分辨两类菌落的方法，选出组成型菌株。比如 加入限制诱导酶合成的物质，使组成型菌株处于选择优势。或者在不含诱导物，但含有经酶解后呈现颜色变化的底物平板上进行培养。 7、放线菌的杂交在本质上和细菌是类似的，但是在操作技术上和霉菌是类似的。 放线菌的杂交过程中会形成异核体或者是部分杂合体，但是异核体是没有用的。 8 原生质体融合育种 酶解法 细菌放线菌 用 溶菌酶 酵母菌 用 蜗牛酶 霉菌 用 纤维素酶 促融剂 PEG 灭活原生质体： 采用热、紫外线 电离辐射以及某些生化试剂，抗生素等作为灭活剂来处理单一亲株或双亲株的原生质体，使其丧失再生能力，经细胞融合后，由于损伤部位的互补可以形成能再生的融合体。 第二章 1、酶活性调节 共价修饰（P酸化酶、酶原的激活） 别构效应（阻遏物 阻遏物蛋白） 缔合与解离（蛋白质的活化与钝化） 竞争性抑制 2、酶合成的调节 诱导 阻遏（2） 机制 暂略 乳糖操纵子 色氨酸操纵子（注意其弱化作用） 弱化调节方式是在mRNA水平上起作用的 3、二元系统调节： 传感器 起蛋白激酶作用 跨膜蛋白 调节器 可溶性蛋白 4、能荷调节 能荷指细胞中ＡＴＰ＼ＡＤＰ＼ＡＭＰ系统中可为代谢反应提供能量的高能磷酸键的量度。 能荷调节　指的是细胞通过改变ＡＴＰ＼ＡＤＰ＼ＡＭＰ三者比例来调节其代谢活动，也称腺苷酸调节。 ５、如何克服反馈调节？ A降低末端产物浓度 a营养缺陷型的利用（不能积累直链代谢途径的末端产物） b渗漏缺陷型的利用 定义：一种特殊的营养缺陷型，是遗传性代谢障碍不完全的突变型。其特点是酶活力下降而不完全丧失，并能在基本培养基上少量生长。将大量的营养缺陷型菌株接种在基本培养基上，挑选生长特别慢而菌落小的即可。 c改变细胞膜的渗透性 如何？ B应用抗反馈调节突变株 定义？ 筛选 末端产物的结构类似物 营养缺陷型的回复突变株 将回复突变子代和野生型菌株杂交看后代是否含有突变型则可以区别真正的回复突变和抑制基因的突变 6、克服分解代谢阻遏的调控？ 避免使用有阻遏作用的碳源和氮源 流加碳源和氮源 利用抗分解代谢阻遏的突变株 在以酶受阻遏的底物为唯一氮源的培养基上，选择正常生长的菌落 7、提高初级代谢产物或者次级代谢产物的方法？ 8、代谢工程的研究对象是 代谢网络 分为相依型网络（改变一个节点的代谢流量分配就可能提高终端产物的产率）和独立型网络（若要提高目标产物的转化率，则所有节点都要改变）。 9、三种节点 及其图像。