单核苷酸多态及胃癌侵袭相关性研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 单核苷酸多态与胃癌侵袭相关性研究 目 的 胃癌是世界最常见的第四大肿瘤，其死亡率在肿瘤中排名第二位，尽管诊断 及治疗的进步，进展期胃癌患者的预后仍然很差。基因因素在胃癌的发展过程中 扮演重要角色，因此，寻找和检测与胃癌侵袭及预后相关的分子标记对胃癌的防 治具有重要的意义。 单核苷酸多态性(SNPs)是在基因组水平由单个核苷酸的变异所引起的DNA 多态性，有望作为生物标记物用于肿瘤的风险评估、筛查、分期及预后的预测。 单体型是SNPs不同等位基因由于连锁不平衡(LD)形成的非随机组合，作为一 个整体遗传给子代，是关联研究的重要手段。 应用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MAI．DI．TOFMS)进行基因分 型已有报道接近100％精确，目前被看做是金标准，应用其对福尔马林固定的石蜡 包埋组织(FFPETS)来源的DNA进行基因分型已被证实是可靠的且可重复的。 我们研究了两个与肿瘤侵袭转移密切相关的基因，肝素酶是目前唯一已知的 可降解硫酸肝素多糖的哺乳动物内切酶，可能参与了肿瘤细胞的运动、侵袭，以 及新生血管形成等诸多与肿瘤侵袭转移相关的环节，为肿瘤防治提供了一个新的 $NPs位点与肝素酶表达水平相关，这为我们接下来的关联研究提供了理论基础。 非转移性细胞l基因(NMEl)是首个被发现的肿瘤转移抑制基因，针对胃癌的 研究发现NMEI基因表达下调与胃癌细胞高侵袭转移能力，尤其是淋巴结转移密 切相关．近来，对于NMEl启动子的研究越来越得到重视，Qu等报道NMEI启 及方式，从而影响启动子活性。 在目前的研究中，我们收集了中国北方汉族人群中404例胃癌术后患者FFPETs l 提取的DNA样本，并收集匹配的404例健康个体外周血提取的DNA样本，利用 MALDI．TOF MS进行基因型分析，目的为研究肝素酶基因和NMEl基因单个SNPs 位点及其构成的单体型与胃癌易感性、临床病理特征及预后的相关性，以寻找功 能性SNPs及单体型作为预测胃癌侵袭能力及预后的分子标记，这对胃癌的防治具 有重要的意义。 方法 1、实验标本收集 病例组标本来源为404例胃癌患者术后石蜡包埋正常胃组织，对照组标本来 源为年龄性别与病例组一比一匹配404名健康人外周血。 2、基因组DNA提取 FFPE提取试剂盒(德国) 福尔马林固定的石蜡包埋组织应用QIAamp@DNA 描述操作。 3、基因分型 我们使用MALDI．TOF MS方法进行基因分型，针对每一个SNP分别设计正 向引物、反向引物、延伸探针，按样品数的1％加入阴性对照，按样品数的1％N 入室内质控标准品对照，按样品数的5％随机选取样品做为重复实验复核。基因型 分析的操作人员不知道所检测标本的病例或对照属性。 4、统计分析 Statisticsl 统计分析用PASW 理特征的关系，使用THEsias软件进行单体型生存分析。 结果 l、肝素酶基因SNP位点及单体型与胃癌发生无关 2 病例组6个SNPs位点各等位基因频率、基因型频率及6个常见单体型频率 与对照组相比无显著性差异。 2、肝素酶基因SNP位点与胃癌细胞分化及胃癌预后相关 rs4364254 Tl基因型携带者与TC+CC基因型携带者相比更易发生高分化和 AA基因 中分化的胃癌病理类型。在单变量生存分析中，我们发现携带rs4693608 型的患者与携带AC．rmG基因型的患者相比有更差的胃癌特异性生存率；在多变 量生存分析中，我们发现携带rs4693608从或rs4364254TT基因型的患者与它‘ 们各自的变异型基因型相比，均表现出更差的胃癌特异性生存率。 3、肝素酶基因CA单体型与胃癌大体类型