番茄红素对转染hSOD1-G93A的NSC34细胞的保护作用和机制研究.pdf

目 录 哪4哪Ⅲ啪㈣删咖1III鲤 V2784488 中文摘要………·…··…············…··…··…·…··…··········l 英文摘要……········…·····…··…··…………··········…·····5 英文缩写··…····…··…·······…··········…···…··…········…9 制研究 前言…··………………-…………．．·…．……………···1l刚舌…一………………一…………一…一…………一．．。il 材料与方法……………………………………………···14 结果……………···……·····……………·····…···…···22 附图···…………·········…·····………………………··24 讨论···········…··…······…·································28 结论……………………………………··……………··30 参考文献…·················e·················…··········…e·．30 综述Nrf2．ARE信号转导通路与神经系统变性疾病………………．33 致谓}·····…········································…··…···…·…45 个人简历…………………………………………·………···46 万方数据 中文摘要 研究 搞 要 目的：肌萎缩侧索硬化症为神经系统变性疾病的一种，其特征是选 择性的侵犯脊髓前角细胞、脑干运动神经元、皮质锥体细胞及锥体束，导 致上、下运动神经元变性死亡。患者出现上下运动神经元同时损害的临床 特征，以单侧或双侧手指活动笨拙无力为常见首发症状。本病晚期出现延 髓麻痹，在患者意识始终清醒的情况下，出现舌肌萎缩、构音不清、饮水 呛咳、吞咽困难等症状，严重影响患者生存质量，给患者带来巨大痛苦。 随着疾病病程的持续进展，在发病之后3～7年内多因呼吸肌受累死于肺 部感染或呼吸肌麻痹所致的呼吸衰竭。目前国际范围内对ALS发病机制 的相关研究主要关注于其相关突变蛋白hSODl一G93A，因此，针对此突 变蛋白所造成的损伤进行治疗方面的研究就具有重要意义。番茄红素是一 种含有碳碳共轭双键的类胡萝卜素，因其结构中大量的C=C．C=C存在使 得其具有抗氧化能力。现有研究证实，番茄红素能够通过Nr亿一ARE信号 转导通路，上调II相解毒酶的表达，从而保护细胞，对抗氧化损伤。目前 研究发现，在SODl突变模型中，至少有14种受Nrf2调控的基因表达出 酶等。但是目前国内外均缺乏将番茄红素应用于治疗神经系统变性疾病的 响及其可能机制，为将来寻求治疗肌萎缩侧索硬化症广泛普及的药物打下 初步的研究基础。 方法： 1实验分组 实验设置空白对照组、转染空质粒组、转染hSODl．G93A组以及不同 茄红素，于转染操作后24／J,时向各组细胞加入DMSO或不同剂量的番茄红 万方数据 中文摘要 2细胞培养及质粒转染 取冻存于液氮罐中的NSC34细胞，予以复苏。培养液使用含有10％ 灭活的胎牛血清及青链霉素的高糖DMEM，培养条件为37℃、5％COz。 于细胞复苏传代3次以后，待细胞突起明显、形态良好、汇合度为 80％～90％时，于细胞对数生长期分别转染hSODl．G93A质粒、空质粒。 2000试剂说明书进行规范操作。转染 转染操作过程依照LipofectamineTM 操作后24小时给予番茄红素处理，继续培养24小时。即转染后48小时 收集标本，用于后续实验。