表皮生长因子受体活化及胰腺癌细胞解离关系的实验研究.pdfVIP

f㈣嬲嬲 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………一1 英文论著摘要……………………………………………………………………．3 二、英文缩略语………………………………………………………………………”5 三、论文 —t￡．．· 刖舌…………………………………………………………………………………………………………·6 材料与方法………………………………………………………………………．7 结果…………………………………………………………………………………………………………．8 讨论………………………………………………………………………………………………………一14 结论………………………………………………………………………………………………………．．15 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………16 五、参考文献…………………………………………………………………………17 六、附录 综述………………………………………………………………………………………………………一19 在学期间科研成绩………………………………………………………………27 致谢………………………………………………………………………………………………………．．28 个人简介…………………………………………………………………………29 ·中文论著摘要· 表皮生长因子受体的活化与胰腺癌细胞 解离之间的关系 目的 本研究通过分析胰腺癌细胞系中表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化EGFR 的分子机制。 方法 本研究采用2种仓鼠胰腺癌细胞系——高侵袭潜能的PC．1．0和低侵袭潜能的 PC一1细胞；也采用2种人胰腺癌细胞系——高侵袭潜能的AsPC．1和低侵袭潜能 Island， U／mL青霉 素G和100 Pg／mL链霉素，于37℃含5％C02的孵箱内培养。本研究采用兔多 Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA)、以及山羊多克隆抗体作用于人p-EGFR的氨基 Cruz 酸序列(SantaBiotechnology，SantaCruz，CA)，也利用异硫氰酸荧光素 (fluorescein Cruz h。为了评价这些 Biotechnology)。将上述4种细胞系种植在室玻片上，并培养36 入到含有40％DF—CM的培养液中培养36h。抑制实验中，在PC．1．0和AsPC．1 细胞培养液中加入10pM 36 h后再继续用10 h。培养后，在室温下以O．5％多聚甲醛固 laMAGl478培养36 定10 min，再以10％山羊血清阻滞30 min，之后加多克隆抗EGFR、抗P．EGFR、 在4℃下培养过夜。最后，在室温下加若丹明(EGFR抗体为一抗)和FITC h。固定后，利用同 Q-EGFR、p-MEKl／2和p-ERKl／2为一抗)标记的二抗培养2 载玻片制备如下：①切片不用一抗处理；②用正常兔或山羊血清和非特异兔或山 Fluovi