表皮细胞生长因子对人脐带间充质干细胞向汗腺细胞转化的作用.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………4 研究论文表皮细胞生长因子对人脐带问充质干细胞向汗腺细胞转化 的影响 前言······…-···········…··············…·······················一···…7月¨吾”’“一一”一””’“一…“”。”’“‘“…一“”一”“‘”。”。“‘”‘“一一， 材料与方法………………………………………………………8 结果···…·····…·············…··············…···········…·…·······15 附图………………………………………………………………17 附表………·…··…………………………………………………27 讨论·····················…············································…·29 结论···…···…·········……···········…············…···········…··32 参考文献…………………………………………………………33 综述干细胞实现汗腺再生的研究进展……………………………36 致谢·····……··········……·········…···················“·…··“·46 个人简历………………………………………………………………47 中文摘要 表皮细胞生长因子对人脐带间充质干细胞 向汗腺细胞转化的影响 摘 要 目的：本研究应用人工体外汗腺细胞损伤的微环境，．诱导人脐带间充 情况，探讨表皮细胞生长因子(EGF)对转化的影响，以及在转化过程中 细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路的作用，为临床应用人脐带间 充质干细胞重建汗腺提供理论依据。 方法：无菌条件下获得足月妊娠分娩胎儿的脐带，将其用剪刀剪切成 4cm左右长短的脐带组织段，无菌生理盐水反复冲洗干净，除去脐带中残 留的血液，剔除血管(一条脐静脉，两条脐动脉)以避免被血管内皮细胞 污染。取出脐带中的华通胶组织(Wharton’S Jelly)，撕裂成条索状， 用剪刀将其剪成大小约lmma的Wharton’S Jelly组织块，将组织块置于 培养瓶中，采用组织块培养法得到脐带间充质干细胞(UC-MSCs)，流式细 胞术检测其表面抗原表达情况；取人头、面、颈部正常全层皮肤，用II型 胶原酶消化法获得汗腺组织，培养汗腺细胞(h-SGCs)贴壁生长，免疫组织 化学法检测其为纯化的h-SGCs；依据干细胞诱导分化的微环境理论，将 种植于transwell板下层，诱导间充值干细胞向汗腺细胞表型转化，并依 结果： CDl4、CD29、 (1)流式细胞技术检测显示：①培养传代的UC．MSCs 中文摘要 几乎不表达，证明培养获得的细胞为纯化的间充质干细胞。CK7、CKl9在 等标志物。②对各组进行流式细胞术检测，组1CK7、CKl9阳性率分别 为：(2．20±1．51)％，(2．23±O．68)％；组2 ±0．74)％，(5．73±0．32)％：组3 (12．57±1．06)％：组4 (P=O．0010．05)； CKl9表面抗原相结合可作为汗腺细胞的标志物，说明其不具有汗腺细胞 的表型；而获得的汗腺细胞的CEA和CKl9染色均为阳性，证明为纯化的 汗腺细胞。不同条件下培养的各组细胞均有部分细胞表达CEA和CKl9阳 性，其中组3表达阳性细胞数最高。每组选取6个视野计算各组细胞表 (3)Western 表达相对强度最高，其次是组2，与组l统计分析后的差异分别为：