雌激素受体α及β活化对实验性自身免疫性甲状腺炎发生、发展的影响研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 雌激素受体Q和13活化对实验性自身免疫性甲状腺炎 ．发生、发展的影响研究 j匕 ．宴L 月 泵 自身免疫甲状腺炎(autoimmune 甲状腺病，近年来发病率明显增加。AIT患者体内存在高滴度抗甲状腺过氧化物 酶(TPo)和甲状腺球蛋白(Tg)抗体，甲状腺内有明显淋巴细胞浸润，可导致甲状腺 功能减退。既往研究认为AIT可能是由于中枢免疫耐受被破坏、天然调节性T细 T 胞(Regulatory 甲状腺滤泡上皮细胞(thyroidepithelialcells，TECs)异常的抗原递呈作用，导 Tcell 致甲状腺特异辅助性T细胞l(Helperl，Thl)持续活化、增殖所致。目 前认为AIT可能并非仅由经典Thl／Th2免疫反应所致，有其他免疫反应[如分泌白 Tcells，Thl7)] 细胞介素17的辅助性T细胞(Interleukin一17secretinghelper 存在。然而AIT的发病机制复杂，尚未完全阐明。AIT的临床特点及一些初步研 究提示雌激素在AIT发病有重要影响：女性发病率为男性的3—4倍，高发年龄在 30．50岁；该病常在妊娠时自发缓解而于分娩后恶化，且青春期发育是促进具有遗 传背景的女性发病的重要因素。近年来发现雌激素受体(estrogenreceptor，ER) 有ERa和ERl32种亚型，其各自介导的对靶器官的影响目前在国际上倍受关注， Q 已发现有些情况下二者活化后产生的效应类似“阴阳平衡。目前最常用的ER 研发重点，可能给雌激素敏感性疾病提供新的防治手段。关于雌激素对AIT发病 有何影响仍不清楚，缺乏直接干预一效应研究，而二种ER亚型各自被激活后所介 导的对该病的作用更是未见报道。 目 的 以Tg免疫易感株小鼠建立的EAT模型为研究对象，利用亚型选择性ER激动 剂，直接探讨ERQ和ERB被各自单独活化对AIT发病的影响，并主要从免疫耐受、 抗原递呈和Th极化与应答角度，探讨了ER活化介导的调节作用机制。 方 法 4周龄CBA／J雌性小鼠在中国医科大学实验动物中心无特定病原体(Specefic pathogen Diet 按美国HarlanTeklad公司提供的配方(Rodent2016)生产的不含植物雌 激素的饲料喂养，随机分为5组。分组如下： OVX对照组：ovX+DMSO／玉米油，皮下注射，每4天1次直至动物被处死。 PPTl组：OVX+PPT(2．0mg／kg体重)皮下注射同上。 PPT2组：OVX+PPT(20．0 mg／kg体重)皮下注射同上。 DPNl组：OVX+DPN(1．2 mg／kg体重)皮下注射同上。 DPN2组：OVX+DPN(12．0 mg／kg体重)皮下注射同上。 于9周龄时给予mTg(200pg／只)加完全弗氏佐剂进行初次免疫，11周龄时 重复免疫一次(mTg加不完全弗氏佐剂)，15周龄时处死动物。 取甲状腺组织做石蜡切片HE染色观察淋巴细胞浸润情况并进行甲状腺炎症 程度评分；留取血清利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定Tg抗体(TgAb)滴度， 包括Tg特异性总IgG和各IgG亚类；化学发光法检测小鼠总甲状腺素(Total thyroxine，TT4)及促甲状腺激素(ThyroidStimulatingHormone，TSH)；取脾 制成单个核细胞悬液，免疫荧光染色、流式细胞学检测Tregs、Thl7及DCs抗原 递呈细胞比例的变化；提取小鼠脾细胞总RN