阿维A调节外周血树突状细胞相关免疫功能的实验探究.pdfVIP

中文摘要 阿维A调节外周血树突状细胞相关免疫功能的 实验研究 摘 要 目的：树突状细胞(dendritic celIs，DCs)是体内功能最强的、专职的抗 cell，APC)，是唯一能够激活“初始型” presenting 原呈递细胞(antigen 免疫反应的细胞，可显著地刺激初始T细胞的增殖和活化，在免疫应答 的启动和免疫调控方面发挥着重要作用，是最强大的次级免疫反应的诱导 ‘ 物。 维甲酸类(retinocacid，RA)是维生素A的天然及人工合成的衍生物。 包含多种同分异构体：13．顺式维甲酸(13．cis．retinoic 反式维甲酸(a11．trans acid，9．eRA)等。它能影响细胞的增殖和分化，调控多种细胞的形态变化并 参与细胞凋亡代谢过程，在临床实践中多用来预防及治疗多种皮肤病。近 年来科学研究发现它对人体免疫系统具有很强的调节作用。阿维A为第 二代维甲酸类药物，化学名称是全反式．9．(4．甲氧基．2，3，6．三甲基苯 基)．3，7一二甲基．2，4，6，8一壬四烯酸，具有调节表皮细胞分化和增殖 的作用，临床上用于治疗多种皮肤病，如银屑病、角化性皮肤病等。 本实验研究阿维A作用于正常人外周血DCs通过观察DCs的形态， 吸附实验检测细胞因子IL．12的量及用同种异体混合淋巴细胞反应来评价 DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力，来探讨阿维A调节人免疫系统的机制， 进而为临床治疗自身免疫性疾病提供实验基础。 方法： l 细胞培养 采集并分离lO例健康人外周血单个核细胞在含15％胎牛血清的 U／ml，PH RPMI．1640培养基(含青霉素100U／ml，含链霉素100 7．2)和 2运用流式细胞仪技术(Flow 激活相关的表面标记CD83的表达情况 中文摘要 将实验分为3组，分别为阴性对照组和两个加药组，加药组分别为阿 维A浓度为lnmol／L一组和阿维A浓度为10nmol／L一组。阴性对照组 不加阿维A培养8天，加药组在培养第7天按药物的不同浓度加入药物 干预12h，收集细胞，应用FCM检测各组细胞表面标记CD83的表达情 况。 3运用FCM检测与细胞免疫成熟和激活相关的表面标记CD86的表达情 况 将实验分为3组，分别为阴性对照组和两个加药组，加药组分别为阿 维A浓度为lnmol／L一组和阿维A浓度为10nmol／L一组。阴性对照组 不加阿维A培养8天，加药组在培养第7天按药物的不同浓度加入药物 干预12 h，收集细胞，应用FCM检测各组细胞表面标记CD86的表达情 况。 4倒置相差显微镜观察经过不同浓度药物处理前后DCs的形态变化。 h 后细胞因子的分泌的影响。 将实验分为3组，分别为阴性对照组和两个加药组，加药组分别为阿 维A浓度为1nmol／L一组和阿维A浓度为10nmol／L一组。阴性对照组 不加阿维A培养8天，加药组在培养第7天按药物的不同浓度加入药物 干预12 h，收集细胞的培养上清液，应用ELISA法检测各组细胞培养上 清液中IL—12的水平。 6用同种异体混合淋巴细胞反应来评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力 用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组DCs对同种异体混合 淋巴细胞增殖的程度。 7运用统计软件SPSS13．0对数据进行统计分析。 结果： 1运用FCM检测与细胞免疫成熟和激活相关的表面标记CD83的表达情 况。 经不同浓度药物作用后，与阴性对照组相比，表面标记CD83的表 达明显增高，阴性对照组、不同浓度阿维A干预12h后，CD83的表达 比较也都有显著性差异(pO．05)。