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水样滤膜的选择 跟研究水样的科学家聊天的时候，他们常常提到，过滤提取水样 DNA、RNA 很不容易。 因为它们微生物丰度低（似乎水源情况）而且珍贵。 为什么说做水样微生物分子生物学研究不容易？ 对于许多研究者来说，不可能做到几个月或者几年一次地经常回到水源地反复采样。 比如南极、波罗的海深海热泉。有些是收集特定事件发生后的水样，如洪水、暴雨。水 样环境每个星期甚至每天都不一样。所以，他们需要从每个样品中获得准确的微生物信 息。 选择滤膜： 对于研究滤膜上过滤水样的微生物多样性，最好的滤膜孔径大小是 47mm。这个尺寸 水既容易过滤，又能满足 DNA、RNA 的提取需求。孔径太小（25mm）的滤膜容易堵塞，太 大（147mm）则需要剪碎以适应 5ml 或 15ml 标准管子。事实上，对水样滤膜额外处理越 少，越能回收到更多微生物 DNA 和 RNA。 MOBIO 实验室使用了一个 5ml 螺纹 tube 管（如左图），为大家展示 47mm 滤膜 高效提取而无需剪碎。该研磨管允许石榴石研磨珠充分接触滤膜过滤面。经过大量 彻底研究，还发现此研磨管能最大限度回收所有类型滤膜的 DNA 。 另一个常遇到的问题是，如何选择滤膜类型。滤膜有很多种，如聚苯醚砜滤膜、混 合纤维素酯薄膜、氧化铝薄膜等。每种薄膜的使用方法不一，在提取的时候会得到截然 不同的结果。薄膜的理化特性也决定了其应用范围。当然，对于提取 DNA 和 RNA，孔径大 小、水样过滤量、抑制因子（如杀虫剂）吸附能力等因素更为重要。换句话说，你有很 多种滤膜可选择。 我们的使用经验： 聚苯醚砜滤膜（Polyethersulfone ）： 最结实的滤膜之一，可以过滤比其它滤膜更多的水样。使用真空泵可快速抽干，易 于折叠不易撕破。能抵受真空泵长时间高压力的滤过。若需要过滤大量低微生物含量的 清亮水样，0.22mm 滤膜的更合适。在提取核酸时，得率可与 PowerWater® DNA 和 RNA Isolation Kits 中自带的混合纤维素酯滤膜相媲美。 混合纤维素酯滤膜（膜醋酸纤维素、硝酸纤维素） : 0.45μm 孔径最合适材质。如果你的水样浑浊，使用 0.22μm 滤膜过滤缓慢容易堵 塞时，建议使用 0.45μm 孔径的滤膜。纤维素滤膜吸水性强，不好处理。贴一个我们实 验室做的演示视频。 有文献显示杀虫剂和除草剂很容易吸附到纤维素滤膜上。若你的样品含有杀虫剂和 除草剂，最好避免使用这类滤膜。 聚碳酸酯滤膜（Polycarbonate ）: 这种滤膜很薄且容易起褶皱，所以不太好用。通常用 0.45μm 孔径的滤膜来预防过 滤时发生阻塞。不像聚醚砜膜（PES ）和混纤膜（MCE ），水样中微生物会停留在滤膜表 面。使得滤膜很容易阻塞，本该滤过的小颗粒也会截留下来。实验证明，珠磨研磨破碎 强度越小，获得 DNA 分子量越大。如果你的样品只是用来做 PCR，可以采用强力的研磨方 法提高得率，暂时忽略片段破碎。 氧化铝（Aluminum Oxide ）: 这类滤膜又称为 Anodisc™过滤膜（Whatman ）。手感接近于薄片玻璃，任何类型研 磨珠都能轻易破碎。很多实验室不愿意使用，因为不好放入到 Tube 中保存。通常用于微 生物量少的海水。有 0.45μm 和 0.22μm 孔径规格。像聚碳酸酯滤膜一样微生物细胞大 多停留在滤膜表面多于陷入滤膜内，更利于 DNA 和 RNA 的提取，不过珠磨研磨时会增加 核酸片段的剪切。 如何折叠滤膜： 大部分人折叠滤膜放进 Tube 管的操作已经非常娴熟了。对于新手，我们提供了一个 演示视频。视频中操作的是一个 0.45μm 的混合纤维素酯滤膜。操作者是 PowerWater® kit 的发明者 Heather Callahan 博士，由技术总监 Nik von Atzigen 解说 (请联系安必胜客 服索取视频文件）。 我们深知提取环境水样不好做，获取每滴水中的 DNA、RNA 也同样非常重要。所以在 开发 PowerWater®和 RapidWater® 产品的时候，从研磨用的 Tube 管、研磨珠的选择、去 抑制因子的溶液、吸附溶液、冲洗溶液到最后的洗脱，我们尽可能优化到每一个步骤。 我们的目的是尽量让你每一步都能够做成功。如果你有任何关于水样 DNA、RNA 提取方面 的问题，请告诉我们。