5胚胎分割6性别控制讲稿完成版.docVIP

胚 胎 分 割 定义；研究历史；胚胎分割方法；影响分割胚发育的因素；胚胎分割技术的应用 一、定义 胚胎分割：通过对胚胎进行显微操作，将一枚胚胎用显微手术等方法分割成二分、四分甚至八分胚,经体内或体外培养,然后移植入受体中,以得到同卵双生或同卵多生后代的技术。 胚胎分割是扩大胚胎来源的一条有效途径，其理论依据是早期胚胎的每一个卵裂球都具有独立发育成个体的全能性。 全能性（totipotenty），是指细胞能参与包括生殖腺在内的各种组织的发育潜力，即发育成完整动物体的能力。其实质是细胞基因组中决定蛋白质编码的所有基因按一定的时空顺序依次表达。 二、胚胎分割方法 (一) 毛细管吹吸法 2-到8-细胞期卵裂球（有的是16细胞，应在致密化之前） 1.透明带切口或除去 2.卵裂球二分 3.半胚注入到空透明带中 早期胚胎切割后发育能力低，一般是经包埋后移植到中间受体的输卵管中培养几天至囊胚，再从输卵管中回收胚胎，最后移植给受体。 4. 琼脂二次包埋 在含有20％血清的培养液中平衡一段时间后，用直径0.3-0.5mm的细管移入加热融化（30-37℃）的1％的琼脂中，吸出后在空气中停留数秒，稍微凝固（但仍是软的）后吹入培养液中，用27号注射器针头把琼脂条切短。 换用直径0.8-1.0mm细管移入加热融化的1.25％的琼脂中，再包埋一次，形成1.5-2.0mm琼脂固体长条。 琼脂：多孔，蓬松，不影响营养物质的吸收。 5.分离胚的体内培养 为什么不采用体外培养？体外培养时囊胚的发育能力低。胚胎的发育阻断。分割胚自身发育能力低。 体内培养时可采用中间受体的生理基础？ 受精过程有种属特异性；但输卵管内的环境无种属特异性，不同物种的胚胎都可以培养。 移入假孕后或同期发情处理后的母畜的结扎的输卵管内，让其发育成囊胚。 6.从中间受体输卵管回收胚胎 在中间受体输卵管中发育几天后，从结扎的输卵管中灌流回收胚胎。 用27号注射针去除包埋的琼脂。 7.胚胎移植入受体子宫角中 小 结：（1） 半胚的分割 固定后的胚胎，用微细玻璃针切开透明带。自切口处伸入微吸管，吸住半数卵裂球，慢慢取出，即可把胚胎等分成两份。4～8-细胞期胚胎也可进行四分胚切割。 （2）单个卵裂球的分离 将2～8－细胞期胚胎，用显微操作或酶液处理去掉透明带后，移入不含有Ca2＋、Mg2＋的mPBS液中，用微吸管反复轻轻吹打即成。 把分割的半胚或单个卵裂球装入事先准备好的未受精或退化胚胎的透明带内培养，发育至桑椹期或早期囊胚时供胚胎移植使用。 (二) 显微手术法 玻璃针、显微手术刀 胚胎切割的工具 显微操作仪的用途 显微手术步骤：除去透明带（也可直接切割）；切割；注入空透明带；移植 小 结：桑椹/囊胚的分割 首先将胚胎在室温下用0.2%～0.3%的蛋白酶液（PBS液稀释）处理30秒种，使透明带软化，便于操作。软化后的胚胎固定后，切开透明带可将桑椹胚2～4等分分割，之后还原于完整的透明带中培养，发育到一定程度时供胚胎移植使用。 上述分割后的胚胎也可不还原于透明带，经裸胚培养后进行移植。部分分割后的胚胎可供性别鉴定或冷冻保存使用。 (三) 徒手分割法： 桑椹胚和囊胚 ：体视显微镜 保险刀片：最薄 先用0.1%－0.2%链霉蛋白酶软化透明带，在实体显微镜下，用自制切割针直接等分切割胚胎，为防止切割时胚胎滚动，可将胚胎置于微滴中进行分割，分开后及时加入液体。 培养皿底部刻几条直线。 无论哪种方法，分割好的半胚应完全分离，可分别装入空透明带内，也可不装入透明带移植。 分割桑甚胚无方向性，而囊胚则必须沿着等分内细胞团的方向分割胚胎。 此外，分割成的半胚在冷冻解冻后经移植，仍可以发育成新个体，并可用来生产异龄同卵双生后代，在育种方面发挥作用。 种公牛的育种：鉴别是否是良种公牛主要依据后裔测定。采集的精液送到各地输精。 牛犊出生需要10个月。到达性成熟需10-18个月，体成熟要2-3年，配种后牛犊出生需要10个月。如果出生的是母犊，再经15个月到性成熟，配种后它再产犊，同时产奶还要10个月，因此一共要即三四年时间。同一个体因年龄不同精液品质也有差异。一般从性成熟到壮龄，精液量和精液密度逐年增加，壮龄之后逐年下降。3-4岁公牛的精液质量最好，受胎率最高，5岁以后精液质量、受胎率呈下降趋势。等得到后裔测定结果后种公牛已步入老龄，精液品质和受胎率已开始下降。胚胎分割与胚胎冷冻技术还可为实施胚胎移植提供大量的胚胎，从而促进了胚胎移植技术的推广应用。 四、影响分割胚发育的因素 1、种和品种差异 牛半胚的妊娠率为50.2% 小鼠半胚产仔率一般在20%以下 2、胚胎分割的时期 山羊： 囊胚的半胚成活率远高于桑椹胚 牛： 囊胚半胚妊娠率和胎儿成活率高于桑椹胚的半胚 原因： 桑椹胚被切割后,