5-羟甲基糠醛(5-HMF)的检测方法.docVIP

羟甲基糠醛的检测方法 （IFU） 1 适用范围 本标准适用于果汁加工中半成品、成品的羟甲基糠醛的测定。 2 仪器及试剂 2.1仪器 2.1.1 722S分光光度计：检测波长550nm； 2.1.2 比色管：10ml带有塞子的比色管。 2.2试剂 2.2.1 巴比妥酸溶液：500mg巴比妥酸在温水浴中溶解，冷却后在容量瓶中定容至100ml。最好在冰箱中保存，保存期为一个月。 2.2.2 对甲苯胺溶液：10.0g的对甲苯胺用10.0ml的冰醋酸溶解，转移至100ml装有50ml异丙醇的容量瓶中，最后用异丙醇定容至刻度。最好在冰箱中用棕色瓶保存，保存期为一个月。 3. 检测步骤 3.1浓缩苹果清汁稀释至11.5°Brix，两根25ml比色管中各移取2ml，用新制备的蒸馏水定容至10ml并充分的混合。在定容后的溶液中加入5ml对甲苯胺，摇匀。其中一根加入1.0ml的水（空白），另一根试管中加入1.0ml的巴比妥酸溶液，摇匀。 3.2 以空白作为对照，用分光光度计在550nm下用1cm比色皿检测并读取吸光度值。巴比妥酸添加以后，吸光度通常很快的下降，反应在3-4分钟达到最大值，用最大值计算。 3.3 实验的准备 空白 检测 果汁（11.5°Brix） 2.0ml 2.0ml 对甲苯胺 5.0ml 5.0ml 巴比妥酸 - 1.0ml 水 1.0ml - 4.计算 HMF= （ P*V）/（ v*E） P标准曲线上读取的HMFmg/L V原被稀释溶液的体积 v被用于显色反应检测的稀释部分的体积 E原始果汁的体积 参考文献：本标准依据IFU检测HMF的方法编制 棒曲霉素、羟甲基糠醛含量的检测方法 (液相色谱法) 1. 适用范围 本标准适用于果汁加工中半成品、成品的棒曲霉素、羟甲基糠醛的测定。 2. 仪器及试剂 除另有规定外,试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。所用流动相需用0.45μm水系滤膜过滤。 2.1试剂 2.1.1冰醋酸（分析纯）； 2.1.2乙酸乙酯（分析纯）; 2.1.3乙腈：色谱纯 一级品 含量99.9%； 2.1.4棒曲霉素标准品：纯度99%； 2.1.5醋酸溶液：c（CH3COOH）= 0.2mol/L； 2.1.6醋酸钠溶液：c（CH3COONa）= 0.2mol/L； 2.1.7醋酸盐缓冲溶液（pH=4.00）：醋酸水溶液:醋酸钠水溶液=164:36（v/v）； 2.1.8无水碳酸钠溶液：c（Na2CO3 ）=14g/L ； 2.1.9流动相: 乙腈：水=10：90（v/v）； 2.2仪器 2.2.1高效液相色谱仪：型号LC2010A、配有紫外检测器； 2.2.2色谱柱：250mm×4.6mm（id）ODS反相不锈钢柱； 2.2.3旋转蒸发器：型号RE52－A 2.2.4 分析检测条件： 流动相： 乙腈：水=10：90（v/v）； 流速： 1.0ml/min； 柱温： 35℃； 检测波长： 276nm； 进样体积： 10μl；保留时间：羟甲基糠醛5.7min；棒曲霉素7.2min。 上述操作参数是典型的，可根据仪器情况对给定的参数作适当的调整，以期获得最佳效果。 3. 检验步骤 3.1试样溶液的制备 称取试样（4.80―5.20）g，精确至0.01g，置于125ml的心形瓶中，用约25ml蒸溜水稀释,然后加入30ml乙酸乙酯振荡5min，静置分层。将水层放入另一个心形瓶中，用30ml乙酸乙酯重复萃取两次,弃去水层，合并三次乙酸乙酯萃取液于另一心形瓶中，再加入10ml碳酸钠水溶液(2.1.8)立即振荡，静置分层(此净化操作应在2min内完成)。再用20ml乙酸乙酯提取碳酸钠水层一次。弃去碳酸钠水层，合并乙酸乙酯提取液，并加入9滴冰醋酸(2.1.1) ，全部转移至旋转蒸发器内,于（40―45）℃下，蒸至剩余溶液约为（1―2）ml时，卸下心形瓶，在40℃下用氮气吹干，用1ml醋酸盐缓冲溶液(2.1.7)溶解残留物，用带有0.45μm水系滤膜的针头式过滤器滤入样品瓶，作为试样溶液。如果试样溶液不能及时测试时，应先存放在冰箱中冷藏，但不得超过48小时。 3.2 测定 在上述色谱操作条件下，待仪器基线稳定后，