云南红豆杉论文种子休眠的初步研究论文：浸种催芽对打破云南红豆杉种子休眠的初步研究.docVIP

云南红豆杉论文种子休眠的 初步研究论文 浸种催芽对打破云南红豆杉种子休眠的初步研究 摘要： 以云南红豆杉（ｔａｘｕｓ ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ ｃｈｅｎｇ ｅｔ ｌ．ｋ．ｆｕ）种子为研究对象，将种子浸种催芽处理后在基本培养基上培养，探索能有效解除种胚休眠时间过长的途径。结果显示，云南红豆杉种子具有内生菌；离体培养条件下种子较易形成愈伤组织，表明种子有足够的内源激素；尽管各浸种方法均不能有效打破种子休眠、促进萌发，但发现细胞分裂素有促进愈伤组织形成的作用，赤霉素处理比清水处理的萌发率略高，这说明单一激素处理不能有效地解除种子休眠，可进一步做激素之间的交互作用以及对激素应答方面的研究。 关键词：云南红豆杉；种子；浸种催芽；离体培养 云南红豆杉（ｔａｘｕｓ ｙｕｎｎａｎｅｎｓｉｓ ｃｈｅｎｇ ｅｔ ｌ．ｋ．ｆｕ）为国家一级保护植物，不仅是珍贵的用材树种，而且其枝叶、树皮中含有紫杉醇（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）等抗癌活性物质，是国产红豆杉中紫杉醇等抗癌活性物质含量较高的树种，具有很高的药用开发价值［１］。对抗癌药物紫杉醇的开发引发了对该种植物天然资源的掠夺性破坏，为保护红豆杉这一珍贵物种资源，保证紫杉醇的充足稳定均衡供应，应积极培育云南红豆杉人工林资源。利用种子繁育发展人工林是一条最直接的途径，云南红豆杉的实生苗具有根系发达、主干直立、不偏冠、生物量大、抗逆性强等优点，适宜于大规模山地种植。但由于云南红 自２０世纪７０年代以来，研究人员相继展开了对欧洲红豆杉（ｔａｘｕｓ ｂａｃｃａｔａ ｌ．）、杂种红豆杉（ｔａｘｕｓ ｍｅｄｉａ ｒｅｈｄ．）、短叶红豆杉（ｔａｘｕｓ ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ ｎｕｔｔ．）等的胚离体培养研究，但试验结果非常有限。１９９１年，ｆｌｏｒｅｓ等［３］报道，从杂种红 ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｖａｒ．ｍａｉｒｅｉ ｃｈｅｎｇ ｅｔ ｌ．ｋ）离体胚的休眠，使其胚萌发率达到了８１％，后将培养物转入成苗培养基上，形成了健壮完整的种 １材料与方法 １．１材料 试验所用云南红豆杉种子采自云南省楚雄州一平浪林场，采取假种皮已变红的种子，去除肉质假种皮，晾干后带回实验室，与湿沙混拌，保存于４℃冰箱中，随用随取。 １．２试验方法 １．２．１处理和浸种将种子用洗衣粉在自来水下充分清洗后，对种皮分别采用两种方式处理。一是对种皮不处理；二是剥去坚硬的外种皮和中种皮。然后分别用以下处理方法进行浸种，并且都为室温过夜，每处理的每一个浓度都为３次重复。①温水浸种，将种子放入４５ ℃温水中不停搅拌至室温，继续浸泡；②赤霉素溶液浸种，溶液浓度分别为５０、１００、３００ ｍｇ ｍｇ／ｌ；④清水浸种（对照）。 ｈ，光强１ ５００ ｌｘ。继代为每个月一次，将培养物转移至新鲜的培养基上，继续培养。种子萌发指长出胚轴和胚根，幼苗指完整长出子叶、胚轴和胚根的小苗。萌发率=萌发数 / 接种数×100%，出愈率=愈伤/接种数×100%。 　　２结果与分析 种皮处理对云南红豆杉种子培养的影响结果见表１，从表１可见，接种时，如果带上种皮，则操作容易，但同时污染率极高；有的培养物甚至在培养３周后才开始出现污染。如果去除种皮（连同内种皮），尽管会增加操作难度，但取得了良好的控制污染效果。而且在相同的培养时间内，去除种皮的种仁在外观上均有变化，有些胚乳有愈伤组织产生，有些胚开始萌动；但保留种皮的种子则没有变化，具体见图１。从这些现象可初步推测，在云南红豆杉的各层种皮间可能存在着内生菌；同时也说明，种皮的存在抑制了种子的萌动。 ２．２浸种方法对萌发率的影响 浸种方法对云南红豆杉种子离体培养萌发率的影响结果见表２，从表２可见，温水浸种、６－ｂａ溶液浸种不能起到打破休眠和促进萌发的作用，但经６－ｂａ溶液处理后的种子在愈伤组织产生的数量上要多一些，这说明在云南红豆杉种子离体培养时，细胞分裂素促进细胞分裂的作用明显大于打破休眠的作用。赤霉素溶液处理后的萌发率稍高于对照，但两者差异仍不明显，而且不同的浓度间表现出萌发率没有规律性的变化，这说明３００ ｍｇ／ｌ浓度以下的赤霉素不能有效地打破云南红豆杉种子的休眠状态。 ２．３不同培养基对萌发率的影响 在ｍｓ和ｂ５两种培养基上，云南红豆杉种子（仁）的萌发情况见表３，显而易见，在ｍｓ和ｂ５两种培养基上的种子萌发率差异不明显。而且观察发现到一个有规律的现象，如果胚乳膨大并开裂的，则其中的胚均不能正常生长成为幼苗，而是随着培养时间的延长，整个外植体都愈伤化；但如果种仁增大而未开裂，在其一端伸出胚根的，则能长出幼苗（图３）。不过幼苗在ｍｓ和ｂ５培养基上却不能继续生长发育，随着培养时间的延长，胚乳干枯后，幼苗逐渐褐化，最终变褐死亡（图４）。 ３小结与讨论 １）试验表明，云南红豆杉种子中存在着内生菌，在