非天然脂肪酸链氨基酸的磷酰化合成及性质的分析研究.pdfVIP

非天然脂肪酸链氨基酸的磷酰化合成及性质研究 摘要 删煳634Y2531 大自然选择磷元素作为生命活动的调控中心，磷元素的引入可以 激活天然．0t．氨基酸羧基的活性，改变天然一0t．氨基酸的化学性质和物 理性质，赋予其重要的特性。例如，良好的表面活性能够使磷酰化氨 基酸形成稳定的LB膜；成肽的性质为仿生化的研究提供了理论依据； 广泛的生物活性在食品工艺中对于提高食品功能性质具有重要的应 用前景。然而，目前，磷酰化氨基酸这些重要的性质在科学领域的应 用未得到深入的开发，关于非天然脂肪酸链氨基酸的磷酰化及其性质 的研究未有报道，因而探讨新型、绿色、稳定的磷酰化氨基酸分子自 组装成囊泡的物理行为及与胰蛋白酶的相互作用在食品加工技术、食 品药物载体、生物膜模拟等科学领域的研究具有重要的意义。 本课题选择非天然脂肪酸链L型氨基酸为底物，自主合成了非天 然磷酰化脂肪酸链氨基酸，运用核磁共振波谱法(N脉)、电喷雾质 谱法(ESI．MS)、高效液相色谱法(HPLC)等对其结构进行了表征。 并利用动态光散射仪(DLS)、等温滴定量热仪(ITC)考察了非天然 磷酰化脂肪酸链氨基酸的临界聚集浓度(CAC)及温度对CAC的影 响；通过傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)对自聚成肽的性质进行了 研究，发现非天然磷酰化脂肪酸链氨基酸及二肽的自聚集物理行为。 另一方面，由于胰蛋白酶在食品中的广泛应用性及磷酰化氨基酸的重 要生物活性，它们之间相互作用的研究对于改善食品功能性质具有重 大的意义，因此通过三维荧光光谱仪探讨了非天然磷酰化脂肪酸链氨 基酸与生物大分子物质(胰蛋白酶)之间的相互作用。 主要研究内容有： (1)非天然磷酰化脂肪酸链氨基酸分子的设计与合成 本课题设计了侧链长度不同的四种非天然脂肪酸链氨基酸(L．2． 氨基戊酸、庚酸、辛酸、壬酸)及其二肽分子，选择赵玉芬院士研究 小组发现的亚磷酸二异丙酯四氯化碳水相法对四种底物进行磷酰化， 优化柱层析条件进行分离和纯化。通过核磁共振波谱仪(NMR)、电 表征，结果表明，产品纯度能够达到实验所需要求。同时，实验结果 证明了四氯化碳水相合成法同样适用于非天然脂肪酸链氨基酸的磷 酰化，对于其它非天然氨基酸的磷酰化合成方法的选择具有重要的参 考意义。 (2)非天然磷酰化脂肪酸链氨基酸物理化学性质的研究 由于一定链长的磷酰化氨基酸两亲分子具有良好的表面活性，因 此利用等温滴定量热法(ITC)、电导率法(DLS)对磷酰化戊酸、庚 酸、辛酸、壬酸的临界聚集浓度(CAC)进行了考察，磷酰化戊酸、 庚酸在25。C能够溶解，磷酰化辛酸、壬酸在50C能够溶解。结果表 mmol／L、O．0125 明，25。C时N．磷酰化戊酸、庚酸的CAC分别为O．0806 rmnol／L、 mmol／L。N．磷酰化辛酸、壬酸50℃时其CAC分别为O．2029 O．2397 mmol／L。结果表明非天然磷酰化脂肪酸链氨基酸具有良好的 1 mmol／L，l1．895mmol／L。根据 酸在25℃的CAC值分别是16．1045 临界聚集浓度值为囊泡制备的浓度选择提供参考。同时，电导率法考 的影响，结果表明随着温度的升高，CAC均呈上升的趋势。同时， 傅里叶变换红外光谱(FT．IR)溴化钾压片法对非天然磷酰化脂肪酸 链氨基酸在异丙醇中的动力学变化进行了研究，证明了非天然磷酰化 脂肪酸链氨基酸在没有催化剂和缩合剂的异丙醇溶液中能够成肽， DIPP…L2 2 2 小时左右，而DIPP…L NH2一辛酸和DIPP…LNH2．壬酸的自聚成肽 反应时间在5小时左右。随着氨基酸侧链长度的增加，其自聚成肽的 时间逐渐减少。利用非天然磷酰化脂肪酸链化氨基酸在异丙醇溶剂中 自聚成肽性质制备囊泡(反应温度50℃、转速10