第七章 免疫学方法及其应用.ppt

?4.机体防御机制 用抗原免疫动物，或通过细胞融合技术和基因工程技术分别 制备多克隆抗体、单克隆抗体和基因工程抗体。 （1）多克隆抗体(polyclonal antibody，PoAb) 定义：将抗原免疫动物，刺激动物体内多个B细胞克隆产生 的抗体，是针对多种抗原决定基的混合抗体。 特点： 来源广泛、制备容易，但不易大量制备； 特异性不高，常出现交叉反应； 评价：应用受到限制。 （2）单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb) ————杂交瘤细胞和单克隆抗体技术 原理：淋巴细胞增殖分化的浆细胞(来自脾脏，有抗原特异性 ，能产生抗体，但短寿)与骨髓瘤细胞(无抗原特异 性，但长寿，能在体外无限繁殖)利用原生质体融合 技术进行细胞融合，获得既能在体外培养又能产生单 一抗体的杂交瘤细胞。 特点：纯度高、特异性强、效价高、无或少血清交叉反应， 制备成本低等特性。 已广泛用作临床诊断试剂或生化治疗剂。 单克隆抗体制备示意图 （2）单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb) 应用：已广泛用作临床诊断试剂或生化治疗剂。 ①对微生物病原体的鉴定。 ②特异性抗原或肿瘤相关蛋白质的检测和鉴定。 ③疾病的被动免疫治疗和生物导向药物的制备。 ④检测血液中的药物含量。 ⑤分离某些昂贵的生物活性物质。 （3）基因工程抗体（重组抗体） 定义：在充分认识Ig基因结构与功能的基础上，应用DNA重组 和蛋白质工程技术，按人们的意愿在基因水平上对Ig分 子进行切割、拼接或修饰，重新组装成的新型抗体分子。 关键问题之一是鼠源抗体可引起人抗小鼠抗体(HAMA)的产生。 特点：保留天然抗体的特异性和主要生物学活性，去除或减少 了无关结构，并可赋予抗体分子以新的生物学活性。 迄今已成功构建多种基因工程抗体，如人-鼠嵌合抗体、人源化 抗体、单链抗体(ScFv)、双特异性抗体(BsAb)及噬菌体抗体等。 ELISA for HIV antibody Microplate ELISA for HIV antibody: coloured wells indicate reactivity 复习思考题 1．什么是抗原、抗体，它们各有哪些性质？ 2．简述单克隆抗体的制备技术及其特性与应用。 3. 简述抗原抗体反应的特点和种类。 4. 比较沉淀反应和凝集反应的异同。 5. 什么是补体结合实验？ 6. 免疫标记技术实验有哪几种？各自的原理是什么 7. ELISA的原理是什么？常用的实验技术及其特点是什么？ 第七章 免疫学方法及其应用 2、免疫酶技术（酶免疫测定技术） （1）酶联免疫吸附法 ④生物素-亲和素系统（BAS)在ELISA中的应用 亲和素是存在于蛋清中的碱性糖蛋白，一个亲和素分子由4个亚基组成，可与4个生物素分子稳定结合； 生物素是存在于蛋黄中的维生素H，化学方法制成的生物素衍生物——生物素-羟基琥珀亚胺酯(BNHS)可与蛋白质性质的抗原、抗体、酶、荧光素、核苷酸等结合形成生物素化的分子。 生物素与亲和素结合具有高度亲和力，且均能耦联抗体、抗原和辣根过氧化物酶而不影响其生物学活性。 第二节 抗原与抗体反应及其应用 四、现代免疫技术 第七章 免疫学方法及其应用 2、免疫酶技术（酶免疫测定技术） （1）酶联免疫吸附法 ④生物素-亲和素系统（BAS)在ELISA中的应用 在生物素-亲和素系统中，借助所形成的亲和素-生物素酶复合物，追踪生物素标记的抗原或抗体，通过酶催化底物显色，可检出相应的抗体或抗原。 由于抗原或抗体分子可耦联多个生物素，且1个亲和素分子可结合4个生物素分子，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。如此组成的新生物放大系统，进一步提高ELISA检测的灵敏度。BAS除用于抗原抗体检测外，还可用于检测DNA和RNA。 第二节 抗原与抗体反应及其应用 四、现代免疫技术 第七章 免疫学方法及其应用 2、免疫酶技术（酶免疫测定技术） （1）酶联免疫吸附法 ④生物素-亲和素系统（BAS)在ELISA中的应用 生物素-亲和素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上预先包被亲和素，再用吸附法包被固相的抗体或抗原，进而再与生物素结合，通过生物素-亲和素反应而使生物素化的抗体或抗原固相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量