女性激素对子宫内膜细胞GJIC影响地体外研究.pdfVIP

◇皱型! 女性激素对子宫内获细胞GJIc影响的体外研究 摘要 ml 内膜，之后立即投入盛有5 PBS的无菌青霉素瓶内，低温条件下迅速转移到 实验室进行分离培养。术后病理诊断未发现子宫内膜存在病变。子宫内膜间质细 胞属于成纤维细胞型，腺上皮细胞属于上皮细胞型，它们都属于贴附生长型细胞。 本研究根据成纤维细胞细胞具有快速贴壁而上皮细胞贴壁较慢的特性，改良了传 统的仅用酶消化、过滤的方法，加用选择性贴壁分离法，分离培养原代子宫内膜 腺上皮细胞及间质细胞，预实验结果显示可获得比传统方法更高的细胞纯度。并 用角蛋白及波形蛋白抗体进行细胞纯度鉴定。 2．MTT法检测： 细胞增殖活性的影响，并用表皮生长因子(EGF)作为阳性对照(n=20)。 3．DNA切口末端标记法(TUNEL)检测： LNG、E2、E1对子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞凋亡的影响(n=6)。 4．流式细胞检测法检测： LNG、E2、E1对子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞生长周期的影响(n=10)。 5．划痕荧光标记法检测： 连接通讯功能的影响(n=6)。 6．激光共聚焦扫描显微镜检测： 达的影响(n=12)。 结果 1．子宫内膜细胞培养情况： 改良方法培养的原代细胞活性高。免疫组织化学鉴定子宫内膜间质细胞波形 蛋白染色阳性，角蛋白阴性，纯度率约(97．89±0．96)％；子宫内膜腺上皮细胞 中，波形蛋白染色阴性，细胞角蛋白染色阳性，阳性率达(95．12±2．It)％。间 质细胞可以有限传代10～20代，腺上皮细胞能传1~2代。 2．左旋炔诺孕酮、雌二醇、雌酮对子宫内膜细胞增殖活性影响： El各浓度对子宫内膜细胞没有明显促进增殖作用，5×10‘5mol／LEl抑制细胞 III Q纨苎童 女性激素对子宫内膜细胞GJIc影响的体外研究 摘要 腺上皮细胞增殖(PO．05)，以促进子宫内膜间质细胞作用明显。LNG没有显著 促进子宫内膜细胞增殖的作用，5x104moFLLNG抑制细胞的增殖，可见到显著 (P0，05)，在时间依赖效应上，各浓度EGF对细胞的增殖作用在24h达到高峰。 TPA对两种细胞均没有显著作用。 10．On∥ml 3．左旋炔诺孕酮、雌二醇、雌酮对子宫内膜细胞凋亡的影响： 细胞后凋亡细胞与对照组比较差异没有显著性(PO．05)；LNG作用细胞后凋亡 率增多： 5×10。5moFL的LNG作用细胞24h后，部分内膜细胞发生凋亡，作用 72h后凋亡细胞显著增多(P0．01)，间质细胞较腺上皮细胞凋亡率略高，作用 ％、(6．84±1．25)％及(11．52±2．39)％。 4．左旋炔诺孕酮、雌二醇、雌酮对子宫内膜细胞生长周期的影响： 5×10一mol／L EGF E2对子宫内膜s期细胞的百分比没有明显影响。10ng／ml 并有随作用时间延长，刺激凋亡作用加强的趋势。 5．左旋炔诺孕酮、雌二醇、雌酮对子宫内膜细胞间隙连接通讯功能影响： 10。5mol／L 体外培养的子宫内膜间质细胞的GJIC功能较腺上皮细胞的强。5X 的LNG作用间质及腺上皮细胞48小时后细胞GJIC功能有所提高。与对照组比较 能有所下降(PO．01)：以TPA作用后下降最显著。 6．左旋炔诺孕酮、雌二醇、雌酮对子宫内膜细胞Cx43、Cx32表达的影响： Cx43、Cx32在子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞的膜浆上都有表达。Cx32 在腺上皮及间质细胞的表达较Cx43的表达强，同种Cx腺上皮细胞表达较间质 EGF作用两种细胞48小时后Cx43、Cx32表达增强 细胞强(PO．05)；10ng／ml X LNG、5×10一moFL E2、2．510～mol／L TPA