维生素B2与发酵.ppt

维生素B2与发酵 维生素B2的概述 一、结构与性质 维生素B2又叫核黄素(riboflavin)。 是核醇与6.7-二甲基异咯嗪的缩合物。 核黄素味苦，在240℃时变暗色，熔 点为275℃～282℃，并在此温度下引起 破坏。 化学结构式 三、维生素B2的发酵 目前核黄素的工业化生产主要有微生物发酵法和化学半合成法两种, 其中微生物发酵法以生产工艺简单、原料廉价、环境友好以及资源可再生等优点而倍受世界核黄素生产商的青睐。 生产菌种 核黄素发酵的主要生产菌包括: 棉囊阿舒氏酵母A shbya gossyp ii 解朊假丝酵母 Candida famata 阿舒氏假囊酵母Eremothecium ashbyii 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 产氨棒状杆菌Corynebactiaaminogensis 下面介绍阿氏假囊酵母生产维生素B2 （1）维生素B2的发酵生产一般采用三级发酵形式。发酵培养基中常用的碳源是葡萄糖。培养基中常用的氮源有蛋白胨、鱼粉、骨胶等有机氮源。 维生素B2的微生物发酵生产采用三级发酵法。 将在25℃培养成熟的维生素B2产生菌的斜面孢子用无菌水制成孢子悬浮液，接种于种子培养基中培养（30℃，30~40h）。 由一级种子到二级种子，逐级扩大培养。 最后将二级发酵液移种至三级发酵罐发酵（30℃，160h），得到维生素B2发酵液。 工业上使用的维生素B2的产生菌主要有阿氏假囊酵母（Eremotecium ashbyii）和棉病囊菌（Ashbya gossypii）2种菌。 经过菌种改良后，维生素B2生产的最高水平可达到10000U/ml。产品质量好，成本低。 生产流程： 培养基 控制注意问题 种子扩大培养和发酵的通气量要求均比较高，通气比一般在1.0，罐压0.05 MPa左右，搅拌功率要求比较高。 阿氏假囊酵母的最适生长温度在28~30 ℃，种子培养34~38h后接入发酵罐，发酵培养40h后开始连续流加补糖，发酵液的pH值控制在5.4~6.2,发酵周期为150~160h。 高浓度的葡萄糖和果糖作碳 源进行核黄素发酵时，可产生碳分解代谢产物阻遏，引起碳源的溢流代谢，产生大量有机酸等副产物．对核黄素合成不利。 解除分解代谢产物阻遏效应的方法目前主要有两种： １）在发酵中采用流加的 方式，通过在发酵过程中按一定控制策略将碳源流加到发酵液中，使葡萄糖可以 维持较低的浓度，从而可以解除分解代谢产物阻遏的影响； ２）也可以采用诱变、 基因工程等技术改造菌种，获得新的菌株来解除分解代谢产物阻遏的影响。 促进剂：DL-甲硫氨酸，生物素等 菌种缺点 然而在利用棉囊阿舒氏酵母、解朊假丝酵母和阿氏假囊酵母等真菌进行核黄素生产时, 存在着发酵周期过长、原料成分配比复杂、需加入不饱和脂肪酸来促进核黄素的产量等缺点。 解决方法 核黄素的提取。即从发酵液中将核黄素提取出来。主要的提取方法有：重金属盐沉淀法，酸溶液法和碱溶液法。 科学研究表明，碱溶液法提取核黄素不仅收益高，且耗能低，随着离心分离设备的不断改进，碱溶液法分离提取核黄素的优越性越来越明显。 核黄素的测定。是对发酵液中核黄素含量、质量的测定。测定的方法有：微生物法、荧光比色法、高效液相色谱技术（HPLC）,核黄素化学发光新方法等。目前核黄素化学发光新方法的精确度和灵敏度高、分析速度快，具有广泛的应用前景。 发酵中的注意事项 整个过程应必须严格控制无菌环境。 发酵罐在使用之前一定要清洗干净，不能留有任何残渣，特别要注意一些管道和死角的残留物质的清洗，避免染菌。 发酵罐与培养基灭菌时要分开灭，葡萄糖单独灭菌，另外磷酸盐也要单独灭菌，因为磷酸盐容易和培养基中其他无机盐在高温下反应生成一些难溶化合物沉淀后不易被菌体分解利用，影响培养基的营养成分，造成菌种在前期生长过程中表现缓慢和营养不良状况。 用发酵罐进行高温灭菌时要注意夹套里是否注水，否则会严重损坏发酵罐。 发酵过程中要严密注意PH的变化。 溶氧的大小能直接反应发酵罐内残糖的利用情况。 发酵后期需要加压来维持氧浓度。 微生物发酵的缺点 与化学合成法相比, 微生物发酵法也存在着某些缺点和不足。例如在核黄素的后期加工与处理过程中, 核黄素的分离纯化比较困难, 难以获得高纯度的核黄素。 谢谢！ * * 性质 核黄素为橙黄色结晶化合物，溶于水，但溶解度很低，水溶液呈现黄绿色荧光 核黄素对热稳定，120℃加热6小时，仅有少量分解，在碱性溶液中较易破坏，在光