建立稳定过表HMGB1蛋白的K562细胞株.pdfVIP

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2017-09-06 发布于贵州
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建立稳定过表HMGB1蛋白的K562细胞株.pdf

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建立稳定过表HMGB1蛋白的K562细胞株

建立过稳定表达HMGBl蛋白的K562细胞株硕士生姓名：闫凡芝指导教师：闫金松主任医师指导小组：李伟平主治医师康志杰主治医师专业名称：内科学(血液) 摘要目的：建立过表达高迁移率族蛋白HMGB Bl， 1(Highmobilitygroupprotein 为研究hmgbl基因在自血病发生及进展中的作用与机制打下基础。 Vector 板应用PCR技术扩增hmgbl编码基因。将其连接入PMDl8．T (PMDl8-T-HMGBl Vector)载体，并转化至大肠杆菌DH5a中。用含浓度为 100pg／ml的氨苄青霉素筛选出的阳性克隆进行扩增、质粒抽提，应用限制性内切酶KpnI／XhoI酶切鉴定，DNA测序得到正确的克隆。然后应用限制性内切酶 Blot分别在转录及蛋白表达水平检测K562稳定细胞株中HMGBl表达情况。验证建立的K562稳定株的功能。上验证该稳定株过表达HMGBl。结论：已成功建立了过表达HMGBl蛋白的K562稳定细胞株及对照细胞株的发生机制打下基础。关键词：过表达HMGBlK562细胞白血病 EstablishmentofstablesublineofK562 cells HMGBl overexpressingprotein． Master candidate：YahFanzhi degree Yan Supervisor：Professor Jingsong Vice—supervisor：LiWeiping KangZhijie Medicine Major：Internal Abstract wasamidedtoestablishastablesublineofK562cells Objective：Thisstudy HMGBland cellsserved弱 (K562-HMGBI)overexpressingproteinK562-pcDNA3．1 control，toabasisfor theroleof 1 inthemechanismof provide exploring hrngbgene leukemogenesis． l was its PCR谢m Was Method：nmgb eDNA，