基于时间分辨荧光纳米微球的呕吐毒素快速定量检测试纸条的研制及性能测试.pdfVIP

基于时间分辨荧光纳米微球的呕吐毒素快速定量 检测试纸条的研制及性能研 1 1 1 2 2 肖理文 、徐秀 、赵皖 、朱超 、陈爱亮 1、上海飞测生物科技有限公司，上海； 2、 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，北京 摘要：本文成功研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的呕吐毒素快速定量检测试纸条，并在粮食 谷物饲料等样品中对其检测性能进行了研 。该试纸条的检出限为25μg/kg ，最低定量限为 82μg/kg，线 性范围为 100-5000μg/kg，线性范围内的添加回收率为 83.51%~113.84%，同一个样本检测 3 次的 CV14.75%，与其他真菌毒素的交叉反应率均小于 5%，与其代谢物的交叉反应率在20% 以内。具有操作 简便、灵敏准确、快速定量、重现性好等优点，适合用于对粮食谷物饲料中呕吐毒素的进行快速定量测 定。 关键词：呕吐毒素；荧光定量免疫层析；快速定量检测 呕吐毒素主体成分为 DON （deoxynivalenol,脱氧雪腐镰刀菌烯醇），属于单端孢霉烯族化合物，主要 由禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、粉红镰刀菌、雪腐镰刀菌等镰刀菌产生 【1】。另外，头孢菌属、漆班菌属、木霉属等菌株都可产生该毒素。单端孢霉烯族毒素共有 150 多种， 是一类强有力免疫抑制剂，所引起典型症状是采食量降低，所以这类毒素又叫饲料拒食毒素。呕吐毒素 （DON ）是其中最重要的一种毒素，主要来自镰刀菌属（Fusarium ），尤其是禾谷镰刀菌 （Fusariumgraminearum ）和黄色镰刀菌（Fusariumculmorum ）。由于它可以引起猪的呕吐，故又名呕吐 毒素（vomitoxin ，VT ）。 该毒素最早于 1970 年从日本香川县一次赤霉病大麦中毒的病毒中发现；1972 年，由日本的Morook 等首次从赤霉病大麦中分离，Yoshizaw 等阐明了这种新的真菌毒素的结构，并将其命名为 4- deoxynivalenol （DON ）；1973 年 Vesonder 等在美国从被镰刀菌污染的玉米中分离出了同样的化学物质。 呕吐毒素是食品中常见的真菌毒素，在自然界中广泛存在，在欧洲及北美常见的3 种毒素是脱氧雪腐镰 刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和 15-脱氧雪腐镰刀菌烯醇。它们具有很高的细胞毒素及免疫抑制 性质，会对人类及动物的健康构成威胁，特别是会对免疫功能造成明显的影响。根据DON 的剂量和暴露 时间的不同可引起免疫抑制或免疫刺激，当人摄入了被DON 污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、 发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统而造成死亡 【2 】。由于中国传统饮食 习惯中粮谷比例大大高于西方，使得呕吐毒素的危害更为突出。1998 年，在国际癌症研究机构公布的评 价报告中，呕吐毒素被列为 3 类致癌物。欧盟要求粮食谷物及其制品中呕吐毒素最高限量要小于 1 / 6 1.0mg/kg；中国谷物饲料中要求粮食谷物及其制品中呕吐毒素的含量低于 1 .0mg/kg，饲料中低于5 mg/kg 【3 】。 目前，国标法测定呕吐毒素采用 HPLC 法，此方法需要大型的仪器设备，设备价格昂贵，操作过程 复杂、时间较长，且无法在现场和基础小型实验室使用。除此之外，也有采用呕吐毒素酶联免疫试剂盒 或胶体金快速检测试纸条等方法，此类方法用于大量样品的筛查，具有操作简便，检测快速，成本较低 等优点，但准确性和重复性较差，容易造成假阳性或者假阴性。因此，急需一种既简便快速，又能准确 定量的检测方法，荧光定量免疫层析检测方法正好可以满足这种需求。本文研制了一种基于时间分辨荧 光纳米微球的呕吐毒素快速定量检测试纸条，并通过对多种粮食谷物饲料样品的实测，验证了改呕吐毒 素荧光定量快速检测试纸条的技术性能。 1 实验材料和方法 1.1 试剂和材料 除注明外，均为分析纯，试验用水均为UP 水。 呕吐毒素抗原抗体、时间分辨荧光纳米微球 （210nm ）由上海飞测生物科技有限公司提供。 NC 膜（135）购自millipore ；牛血清白蛋白（