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大花美人蕉种子脱毒组培快繁技术探究摘要 脱毒的大花美人蕉种子为外植体，采用不同的消毒时间及不同的培养基、切割方法等研究美人蕉的组织培养，结果表明：美人蕉种子消毒时间在5月较12月萌发率要高30%～40%；BA浓度适度的提高，有利于侧芽的分化；糖浓度对芽的分化生长有重要影响。通过不同的试验观察，发现其中使用的3个配方：MS+2 mg/L BA+8 mg/L KT+0.2 mg/L NAA，MS+8 mg/L BA+2 mg/L KT+0.2 mg/L NAA，MS+8 mg/L BA+0.1 mg/L IAA+6%糖，能较好地诱导分化丛生芽，植株生长比较稳定。 关键词 花美人蕉；种子脱毒；组培快繁 中图分类号 S682.2+2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）16-0178-01 大花美人蕉（Canna generalis），又名红蕉昙花，原产于南美及亚洲的印度等地，为美人蕉科美人蕉属多年生草本，具肉质粗壮根茎。花瓣质地轻柔，直立而不反卷，叶丛高大、浓绿，花色艳丽，宜作花镜背景或花坛中心栽植，也可丛植于草坪边缘或绿篱前，展现其群体美，观赏性强。连续的营养繁殖，易使病毒迅速传播，受病毒侵染的植物全身终生带毒，目前尚无药物可治愈[1-2]。国内外解决这一问题的有效途径是培育无病毒苗，为加快大花美人蕉的无病毒化栽培繁殖速度，笔者于2006—2008年进行了该品种的脱毒组培快繁技术研究，采用现代生物技术方法对美人蕉种子进行脱毒，再用组织培养法获得无病毒种苗，进一步建立无病毒种苗无性系并进行快速繁殖，可迅速获得大批量优质、无病毒美人蕉种苗，从而能够从根本上解决美人蕉花叶病防治等问题。 1 材料与方法 1.1 供试材料 美人蕉种子：从日本泷井种苗公司（Takii＆Co.，Ltd.）购进，挑选颗粒饱满、无病虫害、表面光滑的美人蕉种子，将材料在流水中冲洗干净，放置于烧杯中待用。 培养基与激素：MS培养基、1/2 MS培养基、pH值5.6，2%～6%糖、8 mg/L KT、0.1～8.0 mg/L BA、0.1～0.5 mg/L NAA、0.1 mg/L IAA、结冷胶、琼脂粉、肌醇。 1.2 消毒处理 分2次进行消毒处理，其中一部分于2006年5月进行消毒处理开始试验；剩余的冷藏处理，待2007年12月进行消毒处理开始试验。 1.3 消毒方法 将超净工作台及无菌工作室的紫外灯打开，照射20 min后关闭紫外灯。操作前10 min打开超净工作台，首先用70％酒精擦拭工作台面及接触器皿和双手，将解剖刀、剪刀、镊子放于95％酒精中浸泡2 min后取出，在酒精灯火焰上灼烧灭菌后备用。种子经水洗后，浸泡30 min，然后用75％酒精消毒30 s，经过无菌水清洗，再放入0.1％升汞中消毒7～8 min，浸泡时用镊子轻轻搅动，使其与灭菌液有良好的接触。最后用无菌水清洗4～5次，接着把接种的培养瓶口在火焰上灼烧灭菌，然后将消毒后的种子置于培养基中，盖紧瓶盖，将接种瓶放入培养室内培养，记录观察种子萌发状况[3-4]。 1.4 培养条件 培养温度（28±2）℃；相对湿度70％～80％；光照强度为1 500 lx，光照时数10 h/d。 2 结果与分析 2.1 不同时间处理对种子萌发的影响 消毒接种后，1周左右种子便开始萌发，根先出芽后生长。第1批种子（2006年5月消毒）萌发率很高，达到90%以上；而第2批种子（冷藏后于2007年12月消毒）的萌发率明显下降，只有50%～60%。出现此差异可能是与种子在冷藏过程中酶活性的下降有关。在萌发的种子中，有部分种子不发育成芽，因而不能形成完整的植株；这种现象在第2批处理的种子中尤为明显，而且芽萌发状况不整齐，有的甚至需要2个月才形成完整植株。 2.2 激素对大花美人蕉种子培养的影响 将完整的萌发芽去根后转接在MS+0.1 mg/L BA培养基中，植株生长正常，有大量的根系生成，但没有萌发侧芽，每4周转接1次，连续进行5次后，BA的浓度加至1～8 mg/L，并添加了IAA、NAA。试验发现，在BA浓度较低时，生长性能改变不大，无侧芽萌发，即使偶尔有2～3个侧芽的萌发，但在下个转接周期中同样没有新芽的生成；当BA浓度为8 mg/L时，有侧芽萌发的植株明显增多，其中部分植株在下个生长周期中仍表现出有侧芽萌发的现象。从以上试验可以看出：BA在一定范围内适度浓度的提高，有利于侧芽的分化，但是BA浓度的极限值，还有待做极端的试验进行比较确定。按科学理论来推测，BA 浓度并非越高越好，高浓度的BA反而会使分化率降低,芽体长势细弱[5-6]。IAA、NAA对植株生长的影响不是很明显，KT还有待进一步试验观察。 2.3 糖对大花美人蕉种子培养