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1223-β-葡萄糖苷酶高产菌株筛选诱变及其发酵的研究
β-葡萄糖苷酶高产菌株筛选、诱变及其发酵的研究
潘艳,张益波,郭志敏,王诗雨,邢慧萌,林风,滕利荣,侯阿澧*
(吉林大学 生命科学学院, 长春 130012)
摘 要:本研究从常年堆积玉米秸秆的腐土中分离得到一株能生产β-葡萄糖苷酶的菌株,此菌株具有较强的生长繁殖能力和产酶能力。对进行紫外化学诱变,得到菌株UV--DES5。在30 ℃, 150rpm摇床发酵4天后,产酶活力由出发菌株的0.821 U/mL上升到2.352 U/mL, 提高了2.8倍。由于产酶活力较高,使用合适的工农业废料作为发酵培养基时,酶活力增加了0.386 U/mL,UV-4-DES5菌株具有很强的工业化应用价值。
关 键 词:腐土;β-葡萄糖苷酶;UV诱变;DES诱变;工农业废料。
中图分类号:Q814 文献标识码: B 文章编号:
Study on screening and mutation of β-glucosidase-producing strain
PAN Yan, ZHANG Yi-bo, GUO Zhi-ming, WANG Shi-yu, XING Hui-meng, LIN Feng, TENG Li-rong, HOU A-li
(College of life science, Jilin University, Jilin Changchun 130012 China)
Abstract: In this study, a strain zyb 5 which can produce efficient β-glucosidase and growth rapid was isolated from decayed soil. Then the strain was treated by UV and DES, by which a mutant named UV-6-DES5 was isolated. The β-glucosidase activity was increased from 0.821 U/mL to 2.352 U/mL (about 2.8 folds). β-Glucosidase activity increase 0.386 U/mL with various agro-industrial residues were screened as carbon and nitrogen sources. The results suggest that UV-6-DES5 may be a candidate for industrial process of β-glucosidase production.
Key words: Decayed soil; β-Glucosidase; UV; DES; Agro-industrial residues;
(β-葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.21; β-D-Glucosidase)也叫纤维二糖酶,在不同生物中由多种同源酶组成,作用是从非还原性末端催化水解β-葡萄糖苷键释放β-D-葡萄糖。β-葡萄糖苷酶在不同的生物体内和生物技术应用中都有重要的作用,这包括对生物质的降解[1];利用纤维秸秆类生产乙醇[2];作为一种重要风味酶,它能作用于茶叶、葡萄酒以及果汁中的风味前体物质,释放出风味成分,起到增香作用[3];也是合成重要的糖配体[4]等。在纤维素酶的糖化过程中,纤维二糖对内切纤维素酶和外切纤维素酶有很强的抑制作用,添加过量β-葡萄糖苷酶可以减缓这种竞争性抑制作用。
本文从玉米秸秆天然腐烂的腐土中筛选得到了一柱能生产高效胞外β-葡萄糖苷酶的菌株。对此菌株进行紫外、化学、以及化学和紫外的复合诱变[5],得到的UV-6-DES5具有生长速度快,产酶高的特性,可能是解决β-葡萄糖苷酶工业化发酵生产的优良菌株。
1.1.1 试剂 所有用到的化学药品均购买于上海生工生物工程公司,秸秆的腐土采集于常年堆积的秸秆堆下方。
1.1.2 工农业废料 工农业废渣即麦麸(WB)、气爆玉米秸秆(TCS)、未处理的玉米秸秆(UTCS)、酒糟(DDG)、玉米浆(CSL)、豆粉(SM)或豆饼粉(BCP)都在当地获得,将这些原料烘干并进一步粉碎,过0.355mm(45目)筛 备用。
1.1.3仪器设备SKPC-01电热恒温鼓风干燥箱湖北省黄石市医疗器械厂MDF-492超低温电冰箱日本三洋可调式微量取液器德国Eppendorf1.1.4 培养基
每升中含有酵母2.5g;纤维二糖2.5g蛋白胨2.5g;(NH4)2SO4, 1g; KH2PO40.5g和MgSO4 0.2g七叶苷水合物1 g;琼脂粉20 g;灭菌后加入滤菌后的柠檬酸铁铵溶液至三价铁
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