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线粒体DNA复制研究新发现 摘要：从线粒体DNA复制的模型与机制、复制的调控、复制忠实性及其损伤修复3个方面对近年来的研究文献进行了总结.在复制的模型与机制方面,实验结果显示,在哺乳动物中还存在着链结合单向复制和链结合双向复制2种模型.在线粒体DNA复制的调控方面,近年来研究较多的调控因子主要包括mtDNA 聚合酶C、线粒体单链结合蛋白(mtSSB)、引物酶、解旋酶、连接酶、拓扑异构酶、转录因子mtTFA 等最新研究进展及调控机制; mtDNA 复制时期和拷贝数量调控机制的研究也有突破,确定了Abf2p 是mtDNA 复制时期与拷贝数目的调控因子.在mtDNA 复制的忠实性及其损伤修复研究方面,主要涉及DNA PolC的校正功能、错配修复、重组修复、DNA切除修复等,在mtDNA 损伤修复中仅存在碱基切除复机制, 缺少核苷酸切除修复机制. 关键词：线粒体DNA（mtDNA），复制，点突变，控制区，D-环复制，侧翼序列 前言：近期，中国科学院昆明动物研究所的研究人员在对我国人群mtDNA D-环区突变频谱的研究中，在一个正常人家系的mtDNA中意外发现其D-环存在一段50 bp的缺失（m.298_347del50），该缺失导致线粒体保守序列框Ⅱ（CSBⅡ）和线粒体复制起始过程中的引物结合区被移除，而这两个功能单元在以往的研究中被认为与mtDNA的复制起始调控有关。该50 bp缺失在研究的家系母系成员中可以遗传，且在不同的组织样本如头发、血液、唾液等都存在，具有不同程度的异质性。相对于正常对照人群血液细胞的mtDNA拷贝数来说，含有缺失的家系成员的mtDNA拷贝数未见异常，且该家系成员无相关遗传性疾病。这一发现对D-环区的这两个复制功能单元在复制模型中是否必需提出了疑问，提示mtDNA的复制机制可能比以前认为的更为复杂。研究推测，该家系成员的mtDNA的复制可能存在其他代偿途径。对此机制的深入研究，将有望进一步认识mtDNA复制的复杂机制。 正文：线粒体拥有自身的呈环状的双链DNA分子，其复制和转录受到线粒体和核基因的双重调控。线粒体DNA（mtDNA）复制主要存在两种模型，即链置换模型（the strand-displacement model）和链结合模型（the strand-coupled model）。链置换模型认为线粒体复制从特定位点起始，H链先单向复制到mtDNA分子的约2/3位置，使L链复制起始位点暴露，随即引发L链复制；而链结合模型认为线粒体复制从多个位点起始，双链同时双向进行复制。关于线粒体复制模型仍存在一些争论，但这两类复制模型都认为mtDNA中一段长约1kb的非编码序列，即控制区（control region）或称D-环（D-loop）与mtDNA复制密切相关，其中含有很多控制复制的功能元件如复制引物结合位点、复制起始位点、复制终止位点等。在现有mtDNA数据库中，尚未发现正常人D-环区有大片段插入和缺失的情况，这间接说明该区域在mtDNA复制调控中的重要作用。 目前,有关mtDNA 复制的研究多以酵母和哺乳类(或其它脊椎动物) 为研究对象.下面主要以哺乳动物为例来说明mtDNA 复制的结构特征及复制过程.哺乳动物的mtDNA 是一个长度约为 1615 kb 的结构紧密的双链闭合环状分子,外环为重链(H 链)内环为轻链(L链),其mtDNA 复制以D 环复制方式结构紧密的双链闭合环状分子,外环为重链(H 链),内环为轻链(L链),其mtDNA 复制以D 环复制方式进行 , 即 mtDNA 复制的链替换模型( strand-displacement model), 也是目前公认的大多数脊椎动物mtDNA 复制的经典模式 . 以人类mtDNA 的D 环复制为例(Fig. 1) ,位于mtDNA 非编码区内有2 个转录启动子, 分别为重链启动子(heavy-strand promoter,HSP)和轻链启动子( light-strand promoter,LSP), 重链复制的起始点(OH) 就位于此区域. 哺乳类的OH 包括1个启动子及其下游的3 个保守序列区(conserved sequenceblock,CSB ?, CSBò, CSBó) . 轻链复制的起始点(OL)则位于距离OH 约为整个环状mtDNA 的2P3位置. 哺乳动物mtDNA 的D 环复制过程大致可以分为以下4 个阶段:( 1)H 链的首先合成:在H 链复制起始点以L 链为模板, 首先合成一从轻链启动子(LSP)转录而来的RNA 引物,然后由DNA 聚合酶C催化合