维生素E检测方法研究.docVIP

液相色谱法检测的生育酚方法报告 又称维生素E，是一种脂溶性维生素，是最主要的抗氧化剂之一。溶于脂肪和乙醇等有机溶剂中，不溶于水，对热、酸稳定，对碱不稳定，对氧敏感，对热不敏感。 维生素E为微带粘性的淡黄色油状物，在无氧条件下较为稳定，甚至加热至200℃以上也不被破坏。但在空气中维生素E极易被氧化，颜色变深。维生素E易于氧化，故能保护其他易被氧化的物质（如维生素A及不饱和脂肪酸等）不被破坏。 维生素E的化学名称为(1)-2、5、7、8-四甲基 2-(-4、8、12-三甲基十三烷基)-6-苯并二氢吡喃醇醋酸酯，分子式为C31H52O3，结构式为： 根据其化学结构可分为生育酚及生育三烯酚两类。生育酚主要有四种衍生物，按甲基位置分为α、β、γ和δ四种。其中，α-生育酚：R1，R2=CH3；β-生育酚：R1=H，R2=CH3；γ-生育酚：R1=CH3，R2=H；δ-生育酚：R1，R2=H。维生素E以α-生育酚生理活性最高，β-及γ-生育酚仅为α-生育酚的40%和8%。 色谱方法的选择 现行标准中维生素E的检测仅有两个标准——《食品中维生素A和维生素E的测定》（GB/T 5009.82-2003）和《食用植物油中维生素E组分和含量的测定 高效液相色谱法》（NY/T 1598-2008），其中前者介绍了液相色谱法和比色法两种方法。 目前有的文献[1]中指出，气相色谱法虽能正确定量维生素E，但是对不同型分离困难，为了使α-维生素E与β-维生素E及γ-维生素E分离，预先要将试样进行三甲基硅烷化或酯化，同时胆同醇等硬脂类对测定有干扰。另外，如果前期样品处理不好，很容易对毛细管柱造成污染。故建议使用液相色谱法。 内标法和外标法的选择 两种方法的区别： 内标法 外标法 内标物 与待测物相似，且均出峰 不需要 标准曲线 需要，可两点 需要，需多点 优点 定量准确 操作简便 缺点 不容易选择内标物；操作精度高 与标准品严格相同的操作条件 在《食品中维生素A和维生素E的测定》中采用了内标法，内标物为苯并[a]芘，另外文献中也有使用正三十二烷及十六酸十六醇酯等。《食用植物油中维生素E组分和含量的测定 高效液相色谱法》中使用的外标法，国内大多数检测维生素E的文献中都用的是外标法。根据我部门的实际情况，维生素E的检测一般用于豆油脂肪酸的日常检测和协助营销部门的发货定价，故精度要求不是非常高，而内标法每次检测需用到内标物，而内标物的成本通常偏高，因此，外标法可以满足我部门日常检测的需求。 外标曲线 有文献报道[2]，随着甲醇浓度的升高，α-维生素E峰形越尖锐，100％甲醇和98：2流动相得到谱图相似，并能与其它杂质峰很好地分离。这是因为对反相柱来说，甲醇是强洗脱剂，其含量越高，流动相的极性越小，洗脱能力越强，α-维生素E越易被洗脱，而其它杂质却被保留；随着水含量的增加，流动相极性增强，对α-维生素E洗脱能力减弱。综合考虑，最终选择98：2的甲醇为流动相。 柱温对保留时间是有影响的，柱温升高，保留时间会减小，对定性造成影响，因此必须设定柱温。 紫外检测器波长一般在290-296nm之间选择。 有文献[3]称，β-维生素E的峰被γ-维生素E峰掩盖，而通过检测，也证实是这样的。因此，利用现有的α-、γ-、δ-维生素E标准品配制成六个浓度点，绘制标准曲线，各曲线拟合度均在0.9999以上。 色谱条件 流动相：甲醇+水（V/V）=98+2，混匀，临用前脱气。 柱温：30℃。 色谱柱：Eclipse XDB-C18反相柱，4.6×150mm。 检测波长：294nm。 进样量：10μL α-维生素E 浓度/ug/mL 峰面积/mAu*S 4.2 12.23105 21 61.48065 105 309.70511 210 630.57233 420 1249.79663 1050 3149.92212 r=0.99999 γ-维生素E 浓度/ug/mL 峰面积/mAu*S 3 14.15748 15 69.00660 30 141.22311 75 333.88959 150 718.14740 1500 7465.86084 r=0.99998 δ-维生素E 浓度/ug/mL 峰面积/mAu*S 4.152 16.09315 10.38 41.43396 41.52 157.91699 103.8 405.65256 207.6 819.84082 1038 4165.38525 r=0.99999 样品前期处理的选择 目前，国内和AOCS方法中对维生素E检测的前期处理均用到皂化法，上述两标准中的方法也均为皂化法。但已有一些文献[2]中出现了超声波法，该方法简单易行，节省溶剂，减少损失。我们对两种方法进行几组对比实