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右旋柠烯对人胃癌细胞骨架重构和抗转移作用研究 硕士生姓名：李方华 指导教师：邢光明 教授 专业名称：外科学 摘 要 胃癌是消化道最常见的恶性肿瘤之一，其病死率居各种恶性肿瘤之 首。根治性手术为目前其主要治疗手段，但术后复发和转移率仍较高， 也是多数患者死亡的原因。侵袭和转移是恶性肿瘤重要的生物学行为， 其中肿瘤细胞的迁移运动能力对肿瘤浸润和转移中扮演着相当重要的角 色，而有效迁移行为的达成又来源于胞内、外调节因子对细胞骨架动力 装置的调节，因此针对以细胞骨架为治疗靶点的抗肿瘤药物研究成为新 的热点。右旋柠烯是中药桔皮中提纯的单体成份，属于天然单萜烯类化 合物，具有防治化学致癌物诱导的乳腺癌、皮肤癌、肝癌、肺癌、胃癌、 结肠癌和胰腺癌等作用，其低毒、广谱和食用性特征使其具有重要的研 究价值。目前研究表明右旋柠烯能诱导致癌物代谢的酶类表达，使致癌 物解毒、癌症细胞凋亡、细胞再分化和／或抑制了细胞生长调节蛋白转移 酶的异丙基化和微淋巴管的形成，但是对其诱导肿瘤细胞骨架重构，抑 制细胞迁移运动能力的方面研究未有报道。本研究通过观察右旋柠烯对 人胃癌细胞SGC．7901微丝骨架重构的影响和对F．肌动蛋白交联结合蛋 白fascin的研究来为右旋柠烯在临床的应用提供新的抗肿瘤转移理论依 据。 本课题分两部分完成 第一部分 右旋柠烯对人胃癌细胞体外生长增殖和侵袭能力的影响 目的：探讨不同浓度的右旋柠烯对高淋巴结转移人胃癌细胞株 (SGC．7901)体外生长和侵袭能力等生物学行为的影响。 方法：l、以MTT比色法检测不同浓度右旋柠烯对胃癌细胞的细胞 毒作用，并确定右旋柠烯相对无毒剂量。2、应用集落形成实验评价不同 浓度右旋柠烯对胃癌细胞增殖潜能的影响。3、用Transwell小室重建基 底膜侵袭模型评价不同浓度右旋柠烯对胃癌细胞SGC．790l体外侵袭能 力的影响。 结果：l、右旋柠烯O．25mmol／L以上剂量对胃癌细胞具有明显细胞毒 作用，具体量效关系。2、无明显细胞毒剂量的右旋柠烯能有效抑制胃癌 细胞增殖能力，在0．25mmol／L，0．1 形成实验抑制率分别为72．9％i33．3％，6．9％。3、无明显细胞毒剂量的右旋 柠烯能有效抑制胃癌细胞侵袭潜能，在0．25mmol／L，0．125mmol／L， 0．0625mmol／L浓度上抑制率分别为57．6％，45．3％，32．1％。 结论：右旋柠烯对胃癌细胞SGC．7901具有明显的细胞毒作用可显 著抑制其体外生长能力，并具有量效关系。在无明显细胞毒的剂量下， 右旋柠烯能够有效抑制胃癌细胞体外增殖和侵袭能力，并具有量效关系。 第二部分 右旋柠烯对人胃癌细胞骨架重构及相关蛋白Fascin的研究 目的：探讨右旋柠烯对胃癌细胞(SGC．7901)细胞微丝骨架结构重 构影响和fascin与细胞骨架F．肌动蛋白的关系。 方法：1．利用FITC标记的鬼笔环肽为荧光探针，用激光共聚焦显微 镜观察不同浓度右旋柠烯作用后胃癌细胞肌动蛋白细胞骨架(F．actin) 重构情况。2．免疫组织化学方法观察fascin在胃癌中的表达情况。3．蛋 白印迹方法定量检测不同浓度右旋柠烯作用后胃癌细胞fascin表达。 结果：1．右旋柠烯作用后，胃癌细胞微丝骨架明显发生重构，微丝 纤维结构和分布发生明显改变。2．免疫组化显示58例胃癌组织标本中 23例(39．7％)表达阳性，胃癌分化程度越低、肿瘤组织浆膜侵犯阳性、淋 巴结转移阳性、胃癌TNM分期高者fascin表达明显升高，并与病理组织 学分型密切相关。3．蛋白印迹法显示右旋柠烯作用后胃癌细胞fascin含 量降低，药物浓度越高，降低越明显。 结论：fascin的高表达与胃癌的远处转移能力密切相关。右旋柠烯能 通过引起胃癌细胞骨架重构方式抑制胃癌远处侵袭转移，fascin蛋白可能 介导了这一过程。 关键词：右旋柠烯 胃癌转移 侵袭 F．肌动蛋白 Fascin effectof ofactin onthe Study reorganization