原癌基因BCL11A在非小细胞肺癌中的异常表达和其调控机制.pdf

I『I llrll[1 443 步，但只有15-25％的非小细胞肺癌有手术治疗的机会，而即使接受根治性手 术治疗，仍然有50％的NSCLC患者会复发。传统的多学科综合治疗(手术， 放疗和化疗)在提高非小细胞肺癌的五年生存率方面已经出现了“天花板效 应”【l】。随着近几年转化医学的出现，将肺癌基础研究的结果向临床诊疗转化， 开发了一些靶向治疗药物，取得一些令人鼓舞的结果。EGFR突变及其分子构 象改变与靶向抑制剂的关系即是近年来在肺癌转化研究方面突出的例子121。对 于EGFR敏感突变的特定人群，酪氨酸蛋白激酶抑制剂吉非替尼和厄洛替尼能 明显延长晚期NSCLC患者的无复发生存期【3’41。但这些治疗手段最终都会出现 耐药，导致治疗失败，归根结底是由于对NSCLC的疾病机制不清楚。非小细 胞肺癌是一种异质性疾病，肺癌发生发展过程中存在多层次的基因表达调控异 常【ll，包括基因组DNA水平多种基因的体细胞遗传变异、转录水平基因表达异 常及转录本剪切异常【51、microRNA表达调控异常[61，进而表现为蛋白质水平的 功能异常。越来越多的分子表达调控异常与肿瘤特定的细胞周期、生长分化、 细胞移动、凋亡调节等生物学过程改变相关[71。阐明具有驱动作用的特定基因 中文摘要 表达调控变异机制有助于阐明肿瘤特定阶段生物学行为，并有助于针对变异靶 点进行临床干预。 原癌基因活化是许多恶性肿瘤包括肺癌发生的一个重要机制，正常情况 下，原癌基因编码一些生长因子和受体，通过严密的调控网络，控制机体正常 的生长与凋亡嗍。多种机制包括点突变[91、基因融合与易位【101、基因扩增等‘1l】 都能导致原癌基因异常活化，使细胞获得超常的增殖能力和存活能力，从而促 进肿瘤的发生。大量的分子遗传学研究已经显示在肺癌中主要有以下染色体片 5p(SKP2)、7p(EGFR)、8q(PXK2、MYC)、1 肺癌发生的关系也已经得到证实。与抑癌基因不同的是，癌基因发挥功能是显 性作用的，即一对等位基因其中的一个基因存在活化，就能发挥恶性转化细胞 的功能。但是，这些经典的遗传学并不能解释所有的现象，近几年来兴起的表 观遗传学让我们对非小细胞肺癌有了进一步的认识，如p16基因甲基化与鳞癌 的发生有着密切的关系，Bhutani等人还发现p16基因甲基化与早期肺癌的预后 相关，这些可遗传的基因异常并不是由于DNA序列本身发生任何改变114151。常 见的表观遗传学修饰包括甲基化，组蛋白乙酰化等，近几年来，科学家们发现 了一种新的表观遗传学修饰．micmRNA调控，在基因表达调控中发挥着重要的作 用【161。 体内发现L¨【17】，目前在包括人类、果蝇等多个物种鉴别出数千个microRNAs 与mRNA相应的区域结合，从而抑制蛋白质的翻译，在转录后水平调节靶基因的 表达。多种microRNA已被证实参与白血病、淋巴瘤、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤 功 博士学位论文 能异常。从micmRNA水平探索肿瘤的异常翻译后调控机制正成为肿瘤分子遗传 学的新的研究热点。 次发现了let-7在肺癌中低表达，并且低表达的患者预后较差【211。Johnson等确定 NRAS基因，且let-7表达量与生存预后相关，体外实验也证实了过量表达lct．7 平，并与靶向药物EGFRTKI(Gefitinib)疗效相关【卅。随着研究进展，越来越 多的microRNA分子被发现与肺癌发生及预后等相关。尽管肺癌相关 楚。 表达水平变化有机的联系起来并加以验证是基因表达调控研究中新的课题，也 是生命科学研究中一项繁重的任务。 研究目的 本研究通过高通量的芯片技术筛选非小细胞肺癌与癌旁组织中差异表达的 基因，找到一种差异表达的基因BCLl1A。接着用实时荧光定量PCR实验和免疫 组织化学技术分别在基因水平和蛋白水平验证芯片的结果，并将BCLllA表达 水平与临床病理资料进行关联分析，以探明其在非小细胞肺癌发生，发展中的 作用。最后从基因拷贝数变化和microRNA调控两方面探讨其异常表达的机制。