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Aeromonas sp. F3胶原酶性质的研究 白杨，钱斯日古楞，王红英，马蕾 （大连工业大学 生物工程学院，辽宁 大连 116034） 摘要：于海洋污泥中筛选得到的Aeromonas sp. F3所产的胞外酶对胶原蛋白有水解作用以海洋微生物Aeromonas sp. F3为酶源，采用单因素试验法对其所产的胶原酶性质进行研究，并对该胶原酶水解鱼皮的效果进行了分析。结果表明，微生物Aeromonas sp F3源胶原酶℃热处理40 min之后明显失活，该胶原酶的最适反应温度为40 ℃，最适pH为8.6，金属离子Ca2+在0.5 mmol/L浓度时对酶有激活作用。该酶在其最条件下，对鱼皮胶原有显著水解效能，其水解产物的分子量在30 ku以下。 关键词：海洋微生物；胶原酶；酶活；水解 ollagenase from Aeromonas sp. F3 Bai yang，Qian Siriguleng，Wang Hongying， Lei (School of Biological Engineering, Dalian Polytechnic University, Dalian 116034, China) Abstract: Aeromonas sp. F3 screened from marine mud should secrete a protease to hydrolyze collagen. The characteristies of collagenase from Aeromonas sp. F3 including its reaction condition and its thermostability were investigated through single-factor test. Thermal treatment at 50℃ for 40 min resulted in obvious deactivation. With single factor trial, the optimal condition was determined. Its optimum reaction temperature was 40 ℃ and pH value was 8.6. Collagenase activity was activated when 0.5 mmol/L Ca2+ existed. The hydrolysis was very observably with the optimal condition, and the molecular weight of the hydrolyzate was under 30 ku. Key words: marine microorganism; collagenase; enzyme activity; hydrolysis 0 引 言 胶原蛋白独特的三螺旋结构使其结构稳定[1]，一般的加工温度及短时间加热都不能使其分解，从而造成其消化吸收困难将胶原蛋白水解为胶原多肽则其在消化吸收、营养、功能特性等方面都会得到显著的提高。利用生物酶降解胶原蛋白是制备小分子胶原蛋白的最佳途径。微生物胶原酶来源广泛，近年来的研究表明，许多土壤、皮毛、海水来源的微生物都能产生胶原酶[2]。目前，应用最广的细菌胶原酶是Clostridium histolyticum 胶原酶分离纯化经常伴有毒素的产生本所涉及的Aeromonas sp. F3通过明胶培养基筛所得到的胶原酶高产菌株，所分泌胶原蛋白有良好的降解作用。Aeromonas sp. F3属于弧菌科的气单胞菌属是一类接近球状的革兰氏阴性菌，能产生明胶酶[3]，本研究主要是以出发，发酵获取胶原酶，对该胶原酶的动力学性质，包括酶解条件及稳定性进行了初步的探讨，并且对该酶水解鱼皮胶原蛋白的产物进行了研究，为产业化生产胶原蛋白短肽提供了一定的技术参考。 1 实 验 1.1主要材料 产胶原酶Aeromonas sp. F3，由本实验室从海滩污泥中筛选。鱼皮由大连提供。 发酵培养基：葡萄糖3 g/L，酵母浸粉9 g/L，5 g/L，10 mg/L。 仪器：DYY III-6B 型稳压稳流电泳仪 北京市六一仪器厂；DYY-III-28A 型电泳槽 北京市六一仪器厂；冷冻离心机 上海日立电器有限公司；UV755B 紫外分光光度计 上海精密科学仪器有限公司；数显恒温水浴锅 巩义市英峪予华仪器厂。标准蛋白质 北京索莱宝科技有限公司；其他试剂为国产分析纯。 1.2方法 1.2.1胶原酶的培养 于保存斜面上挑取一菌环接入种子培养基，种子培养基即LB培养基，于40 ℃、180 rmin下摇瓶培养24