SDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程(非还原还原).doc

SDS蛋白电泳检测 起草人： 部门审核： QA审核： 替代：□ 新订：□ 日期： 日期： 日期： 修订号：0 批准： 年 月 日 生效日期： 年 月 日 文件分发部门： SDS蛋白电泳检测 一 目的 保证产品电泳电泳分子量和纯度检测按规范进行和检定结果的准确可靠。 二 范围 用于规范电泳电泳分子量和纯度的测定。 三 责任 质量控制部人员。 四 内容 1 试剂与水： 所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。 2 溶液的配制 2.1 A液：1.5MTris·HCl pH8.8 称取90.75gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至8.8,加超纯水定容至500 ml。贴上标贴，室温储存。此溶液有效使用期限为三个月。 6M盐酸（调pH用）：浓盐酸50ml，加50ml纯化水，混匀。 2.2、B液: 0.5MTris·HCl pH6.8 称取60.5gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至6.8,加超纯水定容至1000 ml。贴上标贴，室温储存。 2.3 C液: 30%丙烯酰胺-0.8%N,N-亚甲基双丙烯酰胺溶液 称取300g丙烯酰胺(分析纯),8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解(一般500ml，因为丙烯酰胺具有溶胀性的特点),再定容至1000 ml,用滤纸过滤。贴上标贴，避光4℃保存。 2.4 D液:1%SDS 称取2gSDS(分析纯),用超纯水溶解至200 ml.贴上标贴，4℃保存。 2.5 E液:10%过硫酸铵 称取10g过硫酸铵(分析纯)，用超纯水溶解至100 ml，以1ml/支分装，贴上标贴，－20℃保存。 2.6 4%碳酸钠溶液：称取20g无水碳酸钠, 加水450ml, 搅拌，使完全溶解，并定容至500ml。贴上标贴，室温储存。此溶液有效期为三个月。 2.7 F液:TEMED(市售) 2.8 电泳缓冲液(5X) 称取75g Tris碱(分析纯)，360g甘氨酸(分析纯)，25gSDS(分析纯)，加超纯水溶解，调pH至8.3，定容至5L，贴上标贴，室温储存。临用前加超纯水稀释5倍使用。 2.9、样品缓冲液 2.9.1 4X样品缓冲液（还原性） 称Tris3.03g，溴酚蓝20mg，SDS 8g，盐酸1.89ml，甘油40ml，加超纯水溶解定容至100ml，再加20ml巯基乙醇（分析纯）贴上标贴，室温储存。 2.9.2 4X样品缓冲液（非还原性） 称Tris3.03g，溴酚蓝20mg，SDS 8g，盐酸1.89ml，甘油40ml，加超纯水溶解定容至100ml，贴上标贴，室温储存。 2.10 银染试剂（注：银染试剂配制所使用的超纯水均为两次过滤的无热源水） 2.10.1 固定液：量取500ml甲醇(分析纯)，120ml冰醋酸(分析纯)，加超纯水至1000 ml, 贴上标贴，室温储存。 2.10.2 漂洗液：量取乙醇100ml（分析纯），500ml冰醋酸（分析纯），加超纯水至1000ml，室温储存。 2.10.3 辅染液：称取重铬酸钾10g，量取硝酸2ml，加适量水溶解并稀释至200 ml，用前40倍稀释。贴上标贴，室温储存。 2.10.4 银染液：现配现用。称取2.04g硝酸银，加超纯水溶解定容至1000ml。 2.10.5 显影液：称取30g碳酸钠(分析纯)，加超纯水溶解定容至1000ml, 贴上标贴，室温储存。 2.10.6 终止液：10ml冰醋酸，加水稀释至1000ml。 2.11 考马氏亮蓝染色试剂 2.11.1 考马氏亮蓝染色液：称取1g考马氏亮蓝R-250(分析纯)，200ml甲醇(分析纯)，50ml冰醋酸(分析纯)，加超纯水溶解定容至500ml，搅拌4h，滤纸过滤，贴上标贴，室温储存。（见溶液配制记录）染色液需回收利用，使用周期依染色效果定。 2.11.2 考马氏亮蓝脱色液：量取400ml的甲醇，100ml冰醋酸(分析纯)，加超纯水溶解至1L，贴上标贴，室温储存。 脱色液使用后回收至装有活性炭的瓶中，滤过后可重复利用，使用周期依脱色效果定。 3 器皿与耗品： 所有玻璃器皿为清洁级；tube、tip一次性使用；微波炉盒。 4 仪器设备： 电泳仪电源（200--600V）；电泳槽；灌胶模具；染色具；脱色摇床；微波炉； 凝胶成像仪。 5 环境要求： 相对洁净环境，室温。 6 标准品（or 对照品）： 标准品：市售分子量标准蛋白，按说明书分装后-20℃保存。《标准品分装与使用记录》 6.1 标准品验证 6.1.1 标准品按说明书分装，储存，对标准品进行SDS电泳；分装要填写分装记录《电泳标准品制备及检定》。 6.1.2 相对迁