核桃的分离提纯实验方案.docVIP

核桃中蛋白质的分离提纯 核桃(Juglans regial L．)40 余种，各地均有分布。核桃作为林业副产品，很有开发利用的价值。核桃营养丰富，是世界“四大”干果之一。据测定，每百克含蛋白质14.9 克，脂肪58.8 克，核桃中的脂肪71%为亚油酸，12%为亚麻酸，碳水化合物9.6 克，膳食纤维9.6 克，胡萝卜素30 微克，维生素E 43.21毫克，钾385 毫克，锰3.44 毫克，钙56 毫克，磷294 毫克，铁2.7 毫克，硒4.62 微克，锌2.17 毫克人。就营养成分比较来说，核桃营养价值是大豆的8.5 倍，花生的6 倍，鸡蛋的12 倍，牛奶的25 倍，（1 斤核桃仁相当于5 斤鸡蛋或9 斤牛奶的营养价值）肉类的10 倍。核桃仁在增进人体健康方面，是中药的重要辅料，有顺气补血，止咳化痰，润肺补肾，滋养皮肤等功能。据有关资料记载历史上有许多老寿星和素食家也是把食用核桃作为养生美颜的主要果品。近几年有些癌症患者，经常食用核桃，或核桃仁加工的副食品，明显有控制癌扩散的积极效能；现代医学又证明，经常食用核桃有降低血液中胆固醇和软化血管的作用。 核桃蛋白含量为14%～17%，其蛋白消化率可达87.2%。主要由4类蛋白质构成, 即清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白, 分别占核桃蛋白总量6.81%、17.57% 、5.33% 和70.11% , 核桃蛋白中的醇溶蛋白有独特的氨基酸组成, 其中支链氨基酸和中性氨基酸含量较高, 是植物蛋白中少有的特色组成,据有极高的开发利用价值。核桃蛋白含有18种氨基酸, 其中包括8种必需氨基酸, 且精氨酸、谷氨酸、组氨酸、酪氨酸等含量相对较高, 接近联合国粮农组织( FAO)和世界卫生组织(WHO )规定的标准, 它是一种很好的植物蛋白。 但目前理想的核桃蛋白保健食品在市场上并不多见，可见核桃蛋白极具开发价值。而且核桃在日常的生活和工业生产上的应用也越来越广泛，面临的问题也是愈来愈明显了，现在，我国核桃油生产厂家已达数十家，大量的脱脂核桃渣被作为饲料和肥料或丢弃，废物排放污染环境，其附加值较低。因此对核桃蛋白的研究就显得十分必要。 一、实验材料和仪器 原料:新鲜市售核桃 设备：超临界流体萃取设备（如果有脱脂核桃饼粕可以减少超临界流体萃取的过程）、凯氏定氮烧瓶、消化炉、滴定设备、干燥箱、粉碎机、离心机、恒温水浴锅、烧杯、培养皿、超滤设备等； 试剂：70%乙醇溶液、0.5%氢氧化钠溶液，O．O5mol／L HC1标准溶液、0.15mol/L 氯化钠溶液、饱和硫酸铵溶液、硫酸溶液、氨水、固体氢氧化钠和五氧化二磷、0.02～0.05mol/L 磷酸盐缓冲液或碳酸盐缓冲液等 二、实验原理 1、核桃蛋白的分离纯化 （1）核桃蛋白质特性 核桃蛋白的热稳定性较差, pH 值、温度、加热时间均对其有影响。核桃蛋白质溶出率随温度、pH 的变化而变化。核桃的等电点不是一个, 而是多个。核桃蛋白是一种表面活性剂, 它能提高乳状液稳定性, 在0% - 0.1%蛋白质范围内, 蛋白质乳化能力和乳化稳定性均随蛋白质浓度增加而大。当蛋白质浓度为0% - 0.1% 时, 乳化稳定性可显著提高。质量分数0.5% NaOH 溶液中蛋白质溶解度最高, 为48.36mg /L, 在体积分70% 乙醇溶解度最小, 为3.92mg /L。不同热处理方式对核桃蛋白质主要功能特性有影响,干热处理比湿热处理有利。最适宜的处理条件是干热处理温度为130℃, 时间为25 m in, 对核桃蛋白质主要功能性质影响最小。核桃蛋白在pH 5左右溶解度最小, 而在偏离pH 5酸性或碱性条件下溶解度较高, 核桃蛋白等电点在pH 5左右; 核桃蛋白质变性温度为67.05℃, 远低于其他植物蛋白, 核桃蛋白质对热较敏感。 （2）核桃蛋白质组成： 清蛋白又称白蛋白。是一类不被50％饱和度的硫酸铵溶液沉淀的球状蛋白质。其分子量较低，溶于水，易结晶。在中性溶液中加热即沉淀或凝固。分子量67500，有584个氨基酸残基等电点4一类不溶或微溶于水，可溶于稀盐溶液的单纯蛋白质，可以被半饱和中性硫酸铵25℃时饱和溶解度为4.1mol,即767g/l；0℃时饱满和溶解度为3.9mol,即676g/l。硫酸铵浓溶液的PH 常在4.5～5.5 之间,市售的硫酸铵还常含有少量游离硫酸,PH 值往往降至4.5 以下,当用其他PH 值进行盐析时,需用硫酸或氨水调节）沉淀球蛋白具有免疫作用　醇溶蛋白prolamin(e)）是植物种子储存蛋白的组分之一，不溶于水，可溶于50%～90%乙醇。目前人们普遍的提取醇溶蛋白的方法都是采用乙醇、丙三醇、丁二醇等为溶剂。glutelin)是一组单纯蛋白质，是种子的贮存蛋白质，有富含谷氨酰胺的结构域。不溶于水、稀盐溶液和乙醇，但溶于稀酸和稀碱溶液。6