4免疫学应用中的流式细胞术.pptVIP

六、血小板膜表面受体的标记 血小板悬液的制备 4) 加入0.2ml ACD溶液悬液悬浮，再加入1ml，Tyrode′液，混匀。 5) 离心3000转/分15分钟，弃上清。 6)重复4.5步骤。 7) 加入lml 2%多聚甲醛，或2%戊二醛，室温30分钟，将其血小板固定，放置4℃冰箱保存可达1个月之久 六、血小板膜表面受体的标记 2. 血小板膜受体的标记步骤 1) 取固定后的血小板悬液离心2500转/分，10分钟，去上清。 2) 加入抗血小板膜受体的相应抗体工作液0.lml，室温孵育30分钟。 3) 加入5mlTES悬浮液2500转/分，离心10分钟，弃上清，并悬浮 4) 加入FITC羊抗IgG第二抗体工作液0.1ml室温孵育30分钟。 5) 重复3)步骤。 6) 加入lmlTES悬浮液将血小板悬浮。 7)上机检测 六、血小板膜表面受体的标记 2. 血小板膜受体的标记步骤 七、FCM在AIDS病检测的应用 爱滋病又称获得性免疫缺陷综合症(AIDS)，是一种近年来新发现的免疫性疾病。其临床表现为全身衰竭，免疫机制破坏造成免疫功能下降,本病多发于男女青壮年，主要通过性接触或感染 与 血 液 传播，由于传染性强和病死率极高， 有 人 称 AIDS 病 为〝20 世纪的瘟疫和超级癌症〞，成为世界卫生组织重点控制监测的疾病之一，也成为当今医学卫生防治的重点研究课题 七、FCM在AIDS病检测的应用 人类一旦感染HIV之后，HIV主要选择地侵入人类具有重要免疫功能的T淋巴细胞亚群中的T辅助性细胞(其免疫表型 CD4Th，在其侵入Th细胞后，病毒失去被膜，经逆转录后形成单链DNA，再转录后形成双链在病人的T淋巴细胞中循环复制，使具有重要免疫功能的T细胞群破坏，相继累及全身免疫功能器官，使全身免疫状态下降 七、FCM在AIDS病检测的应用 AIDS病的一个特征的免疫学诊断指标，T淋巴细胞总数减少(正常为65-81%)T细胞亚群比值倒置，Th/Ts1.0(正常为1.3-2.1：1)尤以Th细胞下降显著(正常在44-50%)在9－20%左右，而Ts细胞增高(正常值27－29%)至35-50%，NK细胞减少或活力下降，但B淋巴细胞群则在正常范围，Tc亚群的单克隆抗体CD3、CD4、CD8已大量生产 七、FCM在AIDS病检测的应用 流式细胞术用于AIDS病免疫功能的检测是一个重要的先进方法，使用直标或间标免疫荧光法，同时对TH(CD4)与TS(CD8)进行双参数标记或三参数标记测定计数，目前国内外都已进行了大量FCM检测AIDS 病免疫功能研究，发现CD4的T细胞绝对数进行性减少，FCM与抗Tc亚群单抗的结合应用，将在AIDS病的检测和研究方面起重要作用 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 FCM检测T细胞亚群的参考值： 细胞表面抗原 正常人参考范围 CD3 61.1%－77.0 % CD4 35.4 % －52.0 % CD8 18.4 % －31.2 % CD56 10.4 % －19.8 % CD4/CD8 0.98 －1.94 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 与人体免疫功能有关的主要是淋巴细胞，具有细胞免疫功能主要是淋巴细胞中的T细胞亚群，而B细胞与体液免疫功能有关 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群的功能: T细胞亚群在适应性免疫应答中起着关键作用，T细胞亚群的变化直接影响机体的免疫状态的强弱与结局，对于适应性免疫反应功能在时间、空间层面上的质与量的评价，可以通过T细胞亚群分布和功能检测来实现 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群的功能: 目前越来越多的研究表明，T淋巴细胞亚群在各种临床疾病(如：造血系统疾病，病毒感染与恶性肿瘤等)都有异常改变。 在各种疾病的发生发展过程中测定人外周血中T抑制(T8)和T辅助(T4)淋巴细胞亚群比例，可用来评价体内细胞免疫调节平衡状态 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞亚群的功能: 测定T亚群的相对标记率，特别是T细胞的免疫调节功能，可以帮助研究各种与免疫有关的疾病发病机制。所以，它可以作为临床免疫研究的手段，成为临床检验的一项重要指标 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞的功能及检测参数： 抗原识别：主要通过检测T细胞受体(简称为TCR)与其相应的配体(MHC-主要组织相容性复合物) 2 T细胞活化：活化早期可以检测活化的表型物质CD25、CD71、CD69或MHC-Ⅱ分子与细胞因子IFN-γ、TNF-2等。也可检测细胞内钙离子升高和酪氨酸磷酸化酶等 四、T淋巴细胞及其亚群免疫标记 T细胞的功能及检测参数： T细胞增殖：DNA细胞周期与B