产蛋白酶芽孢杆菌.docVIP

北方民族大学 学生实验论文 论文题目: 产蛋白酶芽孢杆菌的分离、纯化与选育 院(部)名 称: 生物科学与工程学院 学 生 姓 名: 杨嘉怡 专 业: 生物工程 学 号: 班 级: 102班 指导教师姓名: 刘雅琴 实验小组成员: 高瞻，邢艳东，刘帅，阳波 组 别: 第五组 实 验 成 绩: 北方民族大学教务处制 产蛋白酶芽孢杆菌的分离、纯化与选育 摘 要 酶（英语：Enzyme，又称酵素），指具有生物催化功能的高分子物质。几乎所有的细胞活动进程都需要酶的参与，以提高效率。酶作为催化剂，本身在反应过程中不被消耗，也不影响反应的化学平衡。酶具有高度的专一性，只催化特定的反应或产生特定的构型。酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。4000种。在生物体内，酶发挥着非常广泛的功能。由于酶促反应的特异性强，反应条件温和，安全无毒，环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。目前，能由工业生产的50多种酶制剂包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶，葡萄糖异构酶等，这些酶大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的。通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离产酶微生物的方法，菌种的纯化技术及其高产菌的选育技术。 许多细菌和霉菌产生蛋白酶，细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌。本实验将土壤样品（或其他样品）悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛。也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养，分离筛选其他蛋白酶产生菌。生物的遗传信息的改变是通过基因突变、基因重组和基因转移来进行的。基因突变，又称点突变（point mutation），包括自发突变和诱发突变，前者是未经人为施加诱变剂处理而发生的突变，后者是经人为施加诱变剂处理而获得的突变。两种突变都是由于一个或几个碱基的增加、缺失或置换而引起的，因此本质相同，不同的只是诱发突变的频率比自发突变的频率要高得多。这一部分的实验是以紫外线和亚硝基胍为例介绍了物理因素和化学因素对微生物的诱变作用。本实验中，将筛选出的蛋白酶的产生菌株作为出发菌株通过紫外线对微生物诱变作用，对菌株进行选育工作。筛选1．实验仪器和材料 1.1仪器 显微镜恒温水浴锅酒精灯接种针无菌移液管无菌试管量筒1 mL无菌吸管磁力搅拌器玻璃涂棒游标卡尺血紫外线等（15W）细胞计数板。1.2材料及试剂 土壤样品牛肉膏蛋白胨培养基平板酪蛋白平板无菌生理盐水芽孢染色液2 实验方法 2.1 分离 [1]培养基和试剂的配置 酪素培养基：牛肉膏0.3g,Nacl 0.5g，酪素1.0g，琼脂2.0g，蒸馏水100ml，PH7.6-8.0。产蛋白酶发酵培养基：玉米粉6.0g，豆饼粉4.0g,Na2HPO40.4g，KH2PO40.03g，Na2CO30.1g，自来水100ml，PH9.0（灭菌前）。 [2]制备土壤稀释液 称取土样1g，放入盛10ml无菌水的三角瓶中，振摇约20min，使土样与水充分 混合，将细胞分散，用一支1ml无菌吸管吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水 的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一个盛有9ml 无菌水的试管中，充分混匀，以此类推制成10-1，10-2，10-3,10-4,10-5,10-6不同稀释 度的土壤溶液。注意：操作时管尖不能接触液面，每一个稀释度换一支试管。将 稀释度为10-4,10-5,10-6的试管放入80℃的水浴锅中处理10min,以杀死非芽孢杆菌。 [3]倒平板 将灭过菌的培养基分别倒平板，倒入培养皿大约15ml培养液。 [4]涂布 在每个平板底部分别用记号笔写上10-4，10-5，10-6三种稀释度，然后用无菌吸管 分别由10-4，10-5，10-6三种稀释液各吸取0.2ml，小心的滴在对