土壤微生物的采集一般有土样采集.doc

土壤微生物的采集一般有土样采集、增殖培养、培养分离、筛选最后进行纯种分离、毒性试验等。1、采样：一般在有机质较多的肥沃土壤中，微生物的数量最多，中性偏碱的土壤以细菌和放线菌为主，酸性红土壤及森林土壤中霉菌较多，果园、菜园和野果生长区等富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多。选择一定的土壤环境采集土样，将采集到的土样盛入清洁的聚乙烯袋、牛皮袋或玻璃瓶中。2、增殖培养：为了容易分离到所需的菌种,让无关的微生物至少是在数量上不要增加,可以通过配制选择性培养基,选择一定的培养条件来控制.例如碳源利用的控制,可选定糖,淀粉,纤维素,或者石油等,以其中的一种为唯一碳源,那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长,而其它微生物就可能死亡或淘汰.这样对下阶段的纯种分离就会顺利得多.3、培养分离：尽管通过增殖培养效果显著,但还是处于微生物的混杂生长状态.因此还必须分离,纯化.在这—步,增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用,而且控制得细一点,好一点.纯种分离的方法有划线分离法,稀释分离法.4、筛 选：这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件,通过三角瓶的容量进行小型发酵试验,以求得适合于工业生产用菌种.关于菌种的识别，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌，每一类微生物在一定培养条件下形成的菌落各具有某些相对的特征，利用观察这些特征，来区分各大类微生物及初步识别、鉴定微生物。1我们一般都用那种封口袋（塑料的），纸袋不容易保持水分。2当天采当天快递回来，不用加冰袋。3快递一般三天就到，对微生物菌群影响不大。4在冰柜中4度保存，时间不要超过一个月，尽量随采随做。菌株分离（seperation）就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对它们进行分离、筛选，进而得到所需的微生物的过程。 工业微生物产生菌的筛选一般包括两大部分：一是从自然界分离所需要的菌株，二是把分离到的野生型菌株进一步纯化并迸行代谢产物鉴别。 菌种可从以下几个途径进行收集和筛选： （1）向菌种保藏机构和个人索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。国内外著名的菌种保藏机构有：中国微生物菌种保藏管理委员会（CCCCM），美国典型菌种保藏中心（ATTC），英国国家典型菌种保藏所（NCTC），日本的大阪发酵研究所（IFO）等。 （2）由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进行分离筛选。 （3）从一些发酵制品中分离回的菌株，如从酱油中分离蛋白酶产生菌，从酒糟中分离淀粉酶或糖化酶的产生曲等。该类发酵制品经过长期的自然选样，具有悠久的历史，从这些传统产品中容易筛选到理想的菌株。 菌株的分离和筛选一般可分为:采样、富集、分离、产物鉴别、生化鉴定几个步骤。 一、从土壤中采样 1克土壤的含菌量大体有如下的递减规律：细菌（108）＞放线菌（107）＞霉菌（106）＞酵母菌（105）＞藻类（104）＞原生动物（103） （一）根据土壤特点 1．土壤有机质含量和通气状况 采土样最好的上层是5-25cm、一般每克上中含菌数约几十万到几十亿个，并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离到。总的来说酵母菌分布土层最浅，约5-10 cm；霉菌和好氧芽孢杆菌也分布在浅土层。 2．土壤的酸碱度和植被状况 3．地理条件：南方、北方 4．季节条件 ：7-10 月 （二）采样方法 用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5-25cm处的土样10-25 g，装入事先准准备好的塑料袋内扎好、北方土壤干燥．在10-30cm处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤土质、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离。以免微生物死亡。但有时样品较多，或到外地取样，路途遥远，难以做到及时分离，则可采先用选择性培养基做好试管斜面，随身带走。到一处将取好的土样混匀，取3-4g撒到试管斜面上．这样可避免菌株因不能及时分离而死亡。 二、根据微生物生理特点取样 1．根据微生物的营养类型 每种微生物对碳、氮源的需求不一样，分布也有差异。若需要筛选代谢合成某种化合物的微生物，从大量使用、生产或处理这种化合物的工厂附近采集样品，容易得到满意的效果。不少微生物对碳源的利用是不完全专一的，如以油脂为碳源的某些脂肪酶产生菌同样也可以分解淀粉获得能源而生长。 2．跟据微生物的生理特性 三、特殊环境下采样 1．局部环境条件的影响 2．极端环境条件的影响