磷酸缓冲液及(PH6.doc

磷酸缓冲液的（PH6.8）配制 A：磷酸二氢钾：4.559g +500ml蒸馏水 B：磷酸氢二钠：11.908g +500 ml蒸馏水 C：Giemsa原液 A+B+C=22ml+27ml+7.5ml 磷酸缓冲液的（PH7.2）配制 A：磷酸二氢钾：1.77g +1000ml蒸馏水 B：磷酸氢二钠：19.4g +1000 ml蒸馏水 C带制作法 1. 用0.0175M的NaOH溶液处理半分钟后再处理1分钟，取出放在75﹪、75﹪、95﹪、95﹪的各级酒精中漂洗1-2分钟（脱水），将玻片干燥后置于已经预热650C的6SSC溶液中，放在水浴箱中12-17小时，再用370C预热的蒸馏水漂洗干净，染色。 试剂的配制方法 NaOH 0.7g+蒸馏水1000ml 12SSC溶液 微核率操作步骤 培养72小时标本----收集离心1500/分钟（10分钟）----去上清----加预热的0.1MKCL（37度）----混匀，培养箱5分钟----预固定（1ML） 室温5分钟----离心----去上清，固定（5ML）20分钟----离心，去上清，加适量的固定液、混均----制片。 3ml的蒸馏水+3ml的Giemsa. McI1vaine’s储藏液、染色液、冲洗液的配置 目的： McI1vaine’s储藏液是为玻片染色准备。 McI1vaine’s冲洗液是为产前染色体检查准备。 二．料和试剂 1 磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O），分子量是328 2 柠檬酸（C6H8O7），分子量是210.14 3 去离子超纯水 4 甲醇（CH3OH） 三．操作步骤 McI1vaine’s储藏液： 1．A液：0.2M的磷酸氢二钠溶液(71.6g+1000ml水) B液：0.1M的柠檬酸溶液(21.014g+1000ml水) 2．375ml的A液+125ml的B液 3．用1N的盐酸或1M的氢养化钠调节PH到6.8 4．贴上有完整信息的标签（储存要求4度，六个月） McI1vaine’s染色缓冲液 2730ml水+180ml McI1vaine’s储藏液+30ml甲醇 用1N的盐酸或1M的氢养化钠调节PH到6.8 贴上有完整信息的标签（储存要求4度，六个月） McI1vaine’s冲洗缓冲液 2820ml水+180mlMcI1vaine’s储藏液 1N的盐酸或1M的氢养化钠调节PH到6.8 贴上有完整信息的标签（储存要求4度，六个月） 染色液配制：24ml麦氏染色缓冲液+16ml水+14ml磊氏染色储存液（1.6mg/mL） 磊氏染色储存液：0.8g(磊氏染色液Sigma)+500ml(甲醇)，磁力搅拌器搅拌2小时，置于37度的恒温箱72小时。 pH值；Na2HPO4溶液（mL）； NaH2PO4溶液（mL） 5.8 ；8.0； 92.0 5.9 ；10.0 ； 90.0 6.0； 12.3 ； 87.7 6.1 ；15.0 ； 85.0 6.2 ；18.5 ； 81.5 6.3 ；22.5； 77.5 6.4 ；26.5 ； 73.5 6.5 ；31.5 ； 68.5 6.6 ；37.5； 62.5 6.7 ；43.5 ； 56.5 6.8 ；49.0； 51.0 6.9； 55.0 ； 45.0 7.0 ；61.0 ； 39.0 7.1 ；67.0 ； 33.0 7.2 ；72.0 ； 28.0 7.3 ；77.0 ； 23.0 7.4 ；81.0； 19.0 7.5 ；84.0 ； 16.0 7.6 ；87.0； 13.0 7.7 ；89.5； 10.5 7.8 ；91.5