硫化氢对兔心搏骤停复苏后神经功能影响.docVIP

硫化氢对兔心搏骤停复苏后神经功能影响【摘要】目的 观察硫化氢（H2S）对兔心肺复苏后早期NSE、S100B以及海马神经元凋亡的影响。方法 25只日本大耳白兔随机（随机数字法）分为3组：假手术组（S组）、心搏骤停组（CA组）和H2S处理组（H2S组）。兔吸入5%氟烷麻醉后，气管切开，右股静脉置管用于给药，右颈动脉穿刺置管用于血压监测和采血。CA组和H2S组夹闭家兔气管导管8 min制备心搏骤停模型，并分别在恢复自主循环后吸入30% O2或体积分数为80×10—6 H2S。于夹闭气管导管前（基础值）及恢复自主循环后30 min、60 min采动脉血检测血浆中神经元特异性烯醇化酶（neuron—specific enolase， NSE）和S100B的质量浓度。恢复自主循环后60 min处死家兔，取脑后分离海马固定于4%多聚甲醛中，待做组织病理学检查。计量资料以均数±标准差（ x±s ）表示，采用单因素方差分析，组间比较采用SNK— q 检验，以 P 0.05），CA组和H2S组家兔的窒息时间、心肺复苏时间、肾上腺素用量差异无统计学意义（ P 0.05）。见表1。 2.2 各组家兔血浆中NSE和S100B质量浓度 与S组比较，CA组和H2S组家兔ROSC后30 min和60 min时NSE和S100B的质量浓度均显著升高（ P 0.05）；与CA组比较，S100B质量浓度于ROSC后60 min显著降低（ P 0.05）。见表2。 　　2.3 各组家兔海马CA1区存活神经元及活化型caspase—3阳性神经元 与S组比较，CA组和H2S组家兔ROSC后60 min时海马CA1区存活神经元数目明显减少（ P 0.05），活化型caspase—3阳性神经元明显增多（ P 0.05）；与CA组比较，H2S组海马CA1区存活神经元数目增多（ P 0.05），活化型caspase—3阳性神经元明显减少（ P 0.05）。见表3。 光镜下，S组海马CA1区椎体细胞排列整齐密集，细胞结构完整，核仁清晰；CA组细胞排列紊乱，密度减小，神经元肿胀，多数胞核固缩深染，核仁消失；H2S组神经元肿胀明显消失，细胞形态明显改善，偶见个别神经元固缩。见图1～2。 3 讨论 H2S是近年来发现的继一氧化碳和一氧化氮之后的第三气体信号分子，广泛参与体内的多种生理和病理过程。在脑组织中，H2S的浓度高达50～160 μmol/L，表明它在脑内具有一定的生理功能[5]。Nicholson和 Calvert[6]发现H2S作为一种气体信号分子，可以促进神经细胞和神经胶质细胞生成cAMP而发挥神经调节功能。在大鼠心搏骤停复苏模型中，蔺际?等[7]证实ROSC后血浆中H2S浓度显著增高，在6 h达到高峰，认为H2S的变化可能是ROSC后机体代偿性反应的一种体现，但其具体机制仍有待于进一步探讨。 NSE是烯醇化酶的一种同工酶，特异地存在于神经细胞和神经内分泌细胞中，但神经胶质细胞和其他神经组织中不含NSE，因此血浆中升高的NSE可以作为神经元损伤的标志酶[8]。S100B蛋白是一类相对分子质量较小的钙结合蛋白，在脑组织中含量丰富，主要位于中枢神经系统的星形胶质细胞、少突胶质细胞以及周围神经的施旺细胞内，是神经胶质细胞的标记蛋白[9]。心搏骤停复苏后脑组织缺血缺氧，神经细胞和胶质细胞的完整性被破坏，NSE和S100B可从缺血损伤的细胞中“漏出”并透过受损的血脑屏障进入血液循环，因而血浆中NSE和S100B水平升高，且升高的程度和脑损害的严重程度呈正相关[10—12]。马宇洁等[13]的研究表明，心肺复苏后大鼠血浆中NSE和S100B水平明显升高，并分别于ROSC后24 h和6 h达到峰值，以后逐渐回落。在本实验中，家兔心搏骤停复苏后血浆中NSE和S100B质量浓度明显升高，而吸入H2S显著抑制S100B升高的程度，提示了神经细胞和胶质细胞的损伤减少，脑损伤的程度减轻，表明H2S在一定程度上减轻了家兔CA后脑损害。 心搏骤停复苏后，神经元细胞缺血缺氧，大量神经元的凋亡和坏死会引发相应的神经功能障碍，这也是心搏骤停复苏患者预后不理想的主要原因。研究发现caspase—3蛋白参与脑缺血—再灌注损伤后神经元损伤的病理过程，是神经元凋亡中的关键酶，处于凋亡级联反应通路的核心位置，在脑缺血后细胞凋亡中发挥重要作用[14—15]。活化型caspase—3是casepase—3的活化形式。在本实验中，H2S组家兔海马CA1区的活化型caspase—3阳性神经元明显少于CA组，存活的神经元数目也多于CA组，提示吸入H2S能抑制心搏骤停复苏后海马神经元的凋亡。有研究表明，大鼠心肺复苏后，海马CA1区活化型caspase—3阳性神经元数明显增多[16]。Shao等