线粒体自噬在SODI转基因小鼠中的探究.pdfVIP

中文摘要 线粒体自噬在SODl转基因小鼠中的研究 摘 要 lateral 目的：肌萎缩侧索硬化(Amyotrophic 进行性加重的神经系统变性疾病，累及上下运动神经元，主要临床表现为 进行性加重的肌肉萎缩、肌无力，其感觉系统一般不受累，缺乏有效的治 疗方法，病人常在发病后3．5年因呼吸肌麻痹而死亡。90％～95％的ALS 的发病机制尚不清楚，可能是多元的，包括氧化应激、谷氨酸兴奋毒性、 线粒体功能障碍、异常的蛋白质聚集、轴索运输障碍和凋亡等。近年来线 粒体功能障碍在ALS的发生发展中所起的作用越来越受到人们的重视。 线粒体是细胞内最重要细胞器之一，提供细胞生存所需能量，传递细胞信 息，介导细胞凋亡，调节钙离子浓度等。运动神经元的线粒体功能是否正 常至关重要。 在生理条件下，机体可以通过自噬途径清除异常的蛋白质和受损的细 胞器，如线粒体、内质网、过氧化物酶体等，以实现细胞器的更新，维持 细胞稳态，保持旺盛的生理状态，自噬障碍可导致很多神经变性病，过多 的或过少的自噬都是有害的。线粒体经自噬途径被选择性的清除，即线粒 体自噬。线粒体不断的进行增殖和自噬，来维持线粒体的正常形态、数目 1 chain 和功能等。LC3II(Microtubule—associated3-II，LC3II) proteinlight 连接蛋白，在自噬过程中绝大多数被清除，常被人们作为自噬途径通畅与 否的标志物。有研究报道自噬相关基因7(Autophagy—relatedgene7，At97) 缺陷的小鼠骨骼肌中出现线粒体肿胀、嵴断裂、呼吸链活性下降等。在 ALS中，人们也已发现：线粒体嵴断裂、消失、空泡化、呼吸链活性下降 等改变。那么，ALS中线粒体自噬是否存在障碍，这和SODl蓄积是否存 在相关性，仍需进一步研究。 中文摘要 在ALS的发生和发展中所起的作用。 方法：选取SODl．G93A转基因雌性小鼠为实验组，根据病程分为60 天组、症状早期组、终末期组，选取90天的雌性阴性小鼠作为对照组，各 髓迅速投入液氮冷冻，之后保存于．80。C冰箱；采用Pereoll密度梯度离 心法分离得到小鼠脊髓线粒体组分和去线粒体胞浆组分；枞多聚甲醛经 心脏灌注，之后剥离小鼠腰髓，用4％多聚甲醛浸泡或用2．5％戊二醛固定 组织。利用电镜技术、Western 转基因小鼠腰髓运动神经元的形态并检测LC3II和P62在小鼠腰髓各组分 中的含量。 结果： blot 和终末期组较对照组增加，60天组较对照组无明显变化。利用激光共聚 荧光斑点状聚集，60天组和阴性对照组均无斑点状聚集。SODl．G93A转 基因小鼠腰髓前角细胞形态学变化：利用电镜我们观察到，症状早期组及 终末期组SODl．G93A转基因小鼠腰髓前角细胞中出现大量空泡聚集，60 天组和阴性对照组无明显空泡。。 度梯度离心法分离得到线粒体组分和去线粒体胞浆组分，利用Western blot技术分别检测两组分中LC3II的蛋白含量，发现症状早期组和终末期 组线粒体组分中LC3II的含量较对照组明显增多，去线粒体胞浆组分中 共定位增加。 粒体，利用Westernblot技术检测线粒体组分中P62含量，发现随着疾病 的进展，症状早期组和终末期组P62的含量较阴性对照组明显增加，60 天组较对照组无明显变化。 结论：通过对SODl．G93A转基因小鼠腰髓前角细胞的形态学观察及 中文摘要 的含量明显增加，去线粒体胞浆组分中LC3II的含量明显减少。这证实了 线粒体自噬的早期阶段，成为ALS的始动环节或恶化因素。 关键词：肌萎缩侧索硬化；线粒体自噬；微管相关蛋白1轻链3；P62； SODl．G93A转基因小鼠 英文摘要