肢体缺血后适应对缺血再灌注损伤小鼠脑保护作用和机制研究.pdfVIP

Classifiedindex: CODE:10075 U.D.C.: NO ADissertationfortheDegreeofM.Medicine Neuroprotectiveeffectsoflimb ischemicpostconditioningonfocal cerebralischemia/reperfusioninjury inmiceanditsmechanism Candidate: PanLi Supervisor: Prof.Li-kaiS AcademicDegreeAppliedfor: MasterofMedicine Specialty: neurology University: HebeiUniversity DateofOralExamination: May,2015 摘 要 摘 要 目的脑缺血再灌注损伤是缺血性脑血管病的治疗瓶颈。诸多动物实验研究发现 给予肢体缺血后适应 （Limbischemicpostconditioning,LIPostC）对心脏、肾、脑 等脏器的缺血再灌注损伤有明显的保护作用，但其脑保护作用的机制尚不明确。 本课题通过观察LIPostC对局灶性脑缺血再灌注 （ischemiareperfusion,I/R）损伤 小鼠的脑保护作用，探讨其保护机制是否与激活nuclearfactorerythroid2-related factor2 （Nrf2）/antioxidantresponseelement （ARE）信号通路抗氧化应激作用相 关，并研究其对血脑屏障（bloodbrainbarrier,BBB）的保护作用是否与激活 Kruppel样转录因子2 （Kruppel-likefactor2,KLF2）上调occludin 的表达相关。 方法 采用健康成年雄性CD1小鼠90只，应用改良Longa线栓法建立小鼠短暂 性右侧大脑中动脉闭塞(transientmiddlecerebralarteryocclusion,tMCAO)模型。 实验随机分成：假手术组 （Sham）、脑缺血-再灌注组 （I/R）、肢体缺血后适应 组（LIPostC）。Sham组只分离颈部血管，不插线栓。I/R组：为小鼠右侧tMCAO 模型组。LIPostC组：在I/R组缺血60min，再灌注即刻给予同时夹闭双侧股动 脉5min，再灌注5min，反复三次。在各组小鼠脑缺血60min，术后24h后， 分别采用行为学评分、2％ 2，3，5-三苯基四唑氮红 (triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色、干湿重法观察LIPostC 的脑保护作用，采用免疫组化、 Westernblot和实时荧光定量PCR （qRT-PCR）方法测定Nrf2、NQO-1、HO-1 的表达，采用试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）的活性及丙二醛（MDA）含 量的变化情况，通过伊文思蓝 （Evansblue，EB）渗出情况评估血脑屏障的完整 性，Westernblot方法测定KLF2、occludin 的表达。 结果 Sham组中小鼠行为学功能正常，而I/R组、LIPostC组小鼠均出现不同程 度的神经功能缺损，LIPostC组与I/R组相比可明显降低神经功能障碍，差异具 有统计学意义 （P ＜ 0.05）；三组小鼠未梗死侧脑组织含水量无明显差异，I/R 组与LIPostC组小鼠梗死侧脑组织含水量明显高于Sham组，LIPostC组梗死侧 脑组织含水量低于I/R组，差异具有统计学差异 （P ＜ 0.05）；Sham组为正常 脑组织形态无梗死灶，I/R组、LIPostC组可见苍白色梗死灶，LIPostC组与I/R 组比较脑梗死体积明显减小，差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。 免疫组化结果显示，Nrf2、NQO-1、HO-1 阳性细胞数在I/R组表