6 转基因动物.ppt

1997年，英国：Wilmut等的克隆羊Dolly 1999年, 中国陈大元： 利用兔的卵母细胞获得种间核 移植的大熊猫胚胎 2000年，美国：转基因牛 优点： 转基因的效率高，不仅具有“ES细胞途径”的全部优点，且物种适用面广，无需经过嵌合体育种就可获得纯合个体，周期短，效率高。 缺点： 技术上难度。 成功率极低。 胚胎死亡率高。 非一般实验室可以开展。 5、精子载体法 直接以精子为载体的转基因方法。 先将成熟精子与外源ＤＮＡ共培养后，再将成熟的精子与外源DNA进行预培养，使精子有能力携带外源DNA进入卵子中，使之受精，并使外源DNA整合到染色体中。　 优点： 注射针口径 大100倍 能处理兆及亚兆碱基级的基因构建 提高外源基因的整合及表达水平 缺点： 实验结果不稳定 重复性差 6、ＹＡＣ法 　　　利用酵母人工染色体(ＹＡＣ)作为载体获得转基因动物的方法。 　　　酵母人工染色体（ＹＡＣ）载体是近年来发展起来的新型载体, 能克隆百万对碱基的大片段ＤＮＡ。 　　　　　　 　优点： 保证大片段ＤＮＡ的完整性 。 保证较长外源片段在转基因动物研究中的整合率提高 。 保证了目的基因上下游的侧翼序列的完整性，因而可以消除或减弱基因整合后的位置效应。 因此ＹＡＣ介导法制备转基因动物具有广阔的应用前景。 　　畸胎瘤细胞介导法，高效微弹法等方法都不太成熟，应用也较少。 四、转基因动物的检测 分子杂交 斑点杂交 聚合酶链式反应(PCR) 原位杂交 五、转基因动物的特性 整合拷贝数1-100左右，多拷贝常以首尾相连接的形式存在。 整合是随机的。 整合是稳定的，可以传给子代。 外源基因可以在一种组织或多种组织中表达。 少数外源基因两侧序列有重排现象。 基因表达强弱与拷贝数无关，与“位置效应”有关。 六、转基因动物的意义 1. 转基因动物模型与基因治疗 2. 优良动物品种育种 a. 快速生长与肉质改良 b. 增强抗病性，抗冻性 3. 医药领域的应用 a. 抗出血药物 b. 抗凝血药物 c. 血栓治疗药物 d. 肺气肿治疗药物 e. 免疫治疗药物 f. 人型化单克隆抗体 4. 在异种器官移植中的应用 七、转基因动物的应用 1、在基因功能等研究中的应用 2、在动物育种中的应用 抗病 加快生长 提高产毛能力和改善乳品品质 提高动物的生存能力 3、在医学中的应用 生产用于人体器官移植的动物器官 开发新药 作为人类疾病模型 作为生物反应器的应用 转基因猪 转基因猪的特点 生长速度快 瘦肉多 饲料消耗少 不能生育的转基因鱼 转生长激素基因 鲤鱼，比普通鱼 生长快42%,142 天平均体重648g， 经济效益125%。 转基因牛乳腺生物反应器的制备流程 六、转基因动物研究出现的问题 　1、制作转基因动物效率低 2、外源基因在宿主基因组中的行为难以控制 3、转基因表达水平 4、安全性问题 5、传统观念与伦理的挑战 1、制作转基因动物效率低 这是制约这项技术广泛应用的关键。以显微注射法生产转基因动物为例，小鼠、大鼠、兔、牛、猪、绵羊转基因阳性率分别为26%、44%、15%、0.7%、0.9%、0.9%。 2、基因在宿主基因组中的行为难以控制 转基因随机整合于动物的基因组中，很有 可能引起宿主细胞染色体的插入突变，还可造 成插入位点的基因片段的丢失及插入位点的基 因的位移，同时也可能激活正常情况下处于关 闭的基因。其结果导致转基因阳性个体出现不 育、胚胎死亡、流产、畸形等异常现象。 3、转基因表达水平低 许多转基因的表达水平受到宿主染 色体上整合位点的影响，往往出现异位 表达，影响转基因的表达能力，从而使 大部分转基因表达水平较低，极少部分 表达水平过高。 4、安全性问题 5、传统观念与伦理的挑战 可以克隆人吗？！ 　　6 转基因动物 转基因动物是动物基因工程在医学生物学研究中的突出成果。 近十年来，为分子遗传学、发育生物学、医学遗传学、肿瘤研究及优良经济动物的开发研究等多方面做出了很大的贡献。 一、转基因动物的概念 转基因动物(transgenic animal)是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后