紫花苜蓿HO1%2f2基因克隆、原核表达HO1诱导剂β-CD-Hemin缓解镉诱导的苜蓿根部氧化损伤.pdfVIP

摘 要 紫花苜蓿肋耽基因克隆、原核表达及H01诱导剂 伊CD—Hemin缓解镉诱导的苜蓿根部氧化损伤 摘 要 动物中的研究表明，血红素加氧酶系统(hemeoxygen嬲e，HO，EC1．14．99．3) 是一种重要的信号系统，可以降解血红素，最终生成胆绿素(BV)，一氧化碳(CO) 和亚铁离子(FeZ+)．最近研究发现，植物HO不仅具有氧化防护作用，还参与植物侧 根、不定根发生和光敏色素合成等． 植物血红素加氧酶．1受生长发育和胁迫共同调节，在光信号和应激反应中起着重 要作用．本研究以紫花苜蓿(施旃c口舭L．)为材料，克隆了其血红素加氧酶．1／2 且编码一个含283个氨基酸的多肽；胁舳2的开放阅读框为873 bp，编码一个含290 个氨基酸的多肽．MsH01有一个保守血红素加氧酶序列，与植物中其他HO．1表现出 nm01BV．Ⅸa 表明，酶反应动力学参数Vm舣为48．78 h。1姗ol。1蛋白，Km值为2．3 o 山hemiIl，最适温度和pH值分别为37C和7．2．而经大肠杆菌成功表达的MsH02 剂显著诱导，包括血红素和一氧化氮的供体硝普钠．这表明，MsH01可能在氧化反 应中起着重要的作用． 在动物和植物中，H01是诱导型的，它的诱导表达被认为是细胞进行抵御氧化伤 害的一种重要的机制．为了进一步研究MsHOl在紫花苜蓿中的抗氧化作用，本文还 对HOl的诱导作用及其对重金属镉诱导的紫花苜蓿根部氧化损伤的缓解作用．研究 hemiIl抗氧化作用 表明，在镉氧化胁迫下，O．01州CDH的抗氧化作用与单用10斗M 相近，但前者的效果更为有效．镉胁迫引起苜蓿幼苗根部严重的氧化损伤，然而 的含量和LOx的活性的降低，脂质过氧化和质膜的完垫l生的组织化学染色、谷胱甘 肽稳态的重建、过氧化氢的产生和活性氧的重分配所证明．同时我们还检测了氧化损 伤对植物生长的抑制和镉含量的积累，同样也检测了抗坏血酸过氧化物酶APX和超 氧化物歧化酶SOD的转录本和活性的变化。伊环糊精处理则不能降低TBARS的含量。 然而，HO．1有效的抑制剂锌原卟啉可逆转上述CDH的这种细胞保护作用．这些结果 表明CDH通过诱导MsHO．1的表达缓解了镉胁迫产生的氧化损伤． 关键词：血红素加氧酶．1／2；基因克隆；cd2+；氧化胁迫；D．环糊精．氯化血红素； 紫花苜蓿 Ⅱ ABSTltACT MoLECULARCLoNINGAND EXPRESSIoNoFHEMEoXYGENASE．1／2ANDTHE ALLEVIATEVEEFFECTSoFTHEHEME oXYGENASE．1 ON CADMIUM．INDUCEDoXIDATIVESTRESSINTHE RooTSoF舰D量翻GD．SH刀翰L ABSTRACT Heme 1．1 of oxygen嬲e(HO，EC4．99．3)，wllich conversion舶mhemet0 biliVerdin(BV)，c矾)0n fe玎0哪ion(FeZ+)， monoxide(co)and h嬲been t0bea f．actorofthe in proVen key