逐级急性肝损伤大鼠血清TNF-α、IL-6及肝组织HSP70表达变化及其意义.pdfVIP

㈤IIII I II III J llIIII I IIl 889138 逐级急性肝损伤大鼠血清TNF．仅、IL．6和肝组织]Y1 达变化及其意义 摘 要 目的：研究急性肝损伤大鼠血清细胞因子TNF．a、IL．6和肝组织 内HSP70的表达变化，从而为临床探索早期诊断治疗急性肝损伤提供 新的思路和理论依据。方法：10周龄健康雄性SD大鼠适应性饲养一 A，n=lO)；B 周，随机分为4组(每组lO只)：A组，假手术组(Group C， 组，50％肝切除组(GroupB，n-10)；C组，70％肝切除组(Group D，n=10)。所有大鼠术前禁食12h n=10)；D组90％肝切除组(Group 禁水4h。氯胺酮注射液按1 50mg／kg剂量大鼠腹腔注射麻醉。麻醉成功 T方法改进，采用 后，无菌条件下取肋缘下横切口入腹。按照Kubota 改良无血切肝术建立模型。开腹后游离肝脏周围组织，暴露大鼠肝脏， 游离肝动脉、门静脉和胆道。用近肝门处结扎法沿逆时针方向依次切 除相应肝叶。检查无出血后关闭腹腔。参照史冀华等文献方法，SD 大鼠50％肝切除方法为顺序切除肝乳头叶、左外叶、三角叶；70％肝 切除方法为顺序切除肝左外叶、左内叶、肝中叶；90％肝切除方法为 顺序切除肝左叶、肝中叶、肝右后叶、三角叶；对照组即假手术组， 开腹后游离肝周韧带，暴露肝脏约20分钟后关腹。参考预实验结果， 于24h后称重，在氯胺酮麻醉下采血，取标本，心脏采血应用全自动 生化仪测定各组大鼠肝功能指标。双抗体两步夹心酶联免疫吸附法 指数即：肝湿质量／大鼠体质量×100％。并在各组大鼠肝脏相同部位 ．1． 切取肝组织l块，置于10％甲醛溶液中固定，制备石蜡切片，。石蜡切 片，行苏木精．伊红(HE)染色后显微镜下观察肝组织病理改变；免 5．0进行图像 疫组化检测各组肝组织HSP70表达情况，应用Imageplus 分析，计算积分光密度值；积分光密度值表示HSP70蛋白表达量。实 验数据用均数4-标准差(2-4-S)表示，采用单因素方差分析，方差不 齐者应用H检验，比较各组实验数据的差别；相关性分析应用直线相 关分析，认为P0．05有统计学差异。结果：实验大鼠40只全部存活。 (1)一般情况，各组大鼠术后1天生存率100％。对照组动物精神饱 满，灵活好动，进食饮水无明显异常，皮毛光泽度良好；模型组各组 大鼠术后各项肝功能指标明显升高，出现不同程度的精神萎靡不振、 活动减少、尿色发黄、鼠毛竖立、拒食等状态。90％肝切除模型组术 后出现肝功能衰竭的征象，表现为术后苏醒时间延长、嗜睡、对刺激 反应弱、眼睛出现血性分泌物、鼠毛脱落、腹壁手术切口渗血、皮肤 发黄、尿少色深黄等。(2)HE染色显示，A组肝脏组织无明显异常变 化；肝切除各组大鼠肝组织显示广泛肝细胞空泡样变性，细胞肿胀， 细胞的泡浆、胞核内出现大小不一的空泡。肝窦明显扩张，散在肝细 胞点状坏死，汇管区界限清楚，少量炎性细胞浸润，肝小叶形态完整。 D组可见肝细胞胞浆内小空泡相互融合成大空泡，细胞核悬于中央， 胞浆空白，细胞形体显著肿大。(3)免疫组化数据采用积分光密度值 (IOD)作半定量分析，阳性细胞胞浆或胞核内出现棕黄色颗粒。各模 型组与对照组相比较阳性细胞数明显增多，HSP70含量明显升高 造模24h后各模型组大鼠血清IL．6、TNF．Q水平较对照组明显增高 (1)成功建立大鼠逐级急性肝损伤模型，此模型主要表现为各项肝 功能指标明显升高，出现不