连翘根醇提物抗肿瘤和免疫调节作用的实验研究.pdfVIP

中文摘要 连翘根醇提物抗肿瘤及免疫调节作用的实验研究 摘 要 目的：研究连翘不同部位(根、叶、果)提取物对食管癌细胞增殖的 extract 影响，筛选出作用效果最显著的部位；观察连翘根醇提物(ethanol ofForsythiasuspensa 因及蛋白水平探讨其作用的分子机制；分析FSEER体内免疫调节活性， 为其作为抗肿瘤新药开发提供参考依据。 方法： 1 的影响，计算对细胞增殖的抑制率，并在光镜下观察细胞形态变化。 2 mg／m1) 作用6h、12h、24h后，对TE．13细胞增殖的抑制作用。 3采用瑞．姬染色法观察不同浓度FSEER(0．4、O．5、0．6 mg／m1)作用于 TE．13细胞24h后，对细胞形态的影响。 4采用流式细胞(Flow 0．6 FSEER作用不同时间 mg／m1)作用于TE．13细胞24h，以及0．6mg／ml (6h、12h、24h)后，对细胞凋亡率以及线粒体膜电位的影响。 5 采用免疫印迹技术(Westernblot)检测细胞凋亡相关蛋白(PARP、 p-ERKl／2在FSEER诱导TE．13细胞凋亡过程中的作用。 6通过RT-PCR方法检测O．4、0．5、0．6 表达的变化。 7将16只8～lO周龄近交系BALB／c小鼠随机分为四组，建立小鼠免疫 抑制模型，其中实验组和模型对照组均一次性腹腔注射Cy，200mg／kg。 小鼠模型建立后第2天开始，实验组通过灌胃方式分别给予不同剂量 中文摘要 均连续给药10天，正常对照组不做任何处理，正常饲养。每天观察小鼠 生存状态，于末次给药12h后称量体重，眼球取血处死小鼠，分离脾脏、 骨髓、外周血，备用。 8无菌分离各组小鼠脾脏，用滤纸吸干残血后称重，分别计算脾脏指数 (SI)，公式如下：SI=脾脏重(mg)／体重(g)。 细胞和CD3+CD8+T细胞比例以及CD4+／CD8+比值的变化。 11通过瑞氏．姬姆萨染色观察各组小鼠骨髓象的变化。 结果： 1 对TE．13细胞增殖有不同程度的抑制作用，其中FSEER效果最明显，与 各组比较，差异具有统计学意义(尸O．05)。 2不同浓度FSEER(0-3、0．4、O．5、0．6、0．7、O．8 mg／m1)对TE．13细 胞增殖均有抑制作用，且具有浓度和时间相关性，与对照组相比差异具有 统计学意义(尸0．05)。 3 前期的形态学改变，细胞皱缩变圆，空泡样变，染色质疏松。随着FSEER 浓度的增加，细胞出现核固缩、核碎裂等典型的凋亡形态学改变，而对照 组细胞大小均匀，生长密集。 4 h 后，TE．13细胞凋亡率逐渐升高，0．6 FSEER处理6、12、24h后， mg／ml TE．1 3细胞凋亡率随时间延长而明显增高，组间比较差异有显著性 (氏O．05)，各实验组与对照组比较差异有显著性(尸O．01)。 5 TE．13细胞经O．4、O．5、O．6mg／ml 作用浓度的增大，发生线粒体膜电位损伤的细胞数目逐渐增多，且明显高 于对照组，差异具有统计学意义(尸0．01)。 6 Western 3细胞cleaved blot分析结果显示，经FSEER处理后，TE．1 PARP、cleaved caspase．3、cleaved