酪氨酸酶-黑色素报告基因系统在HepG2细胞表达的MRI实验探究.pdfVIP

◇!苎笔晨 酪氨酸酶基因．黑色素报告基因系统的体外MRJ实验研究 酪氨酸酶一黑色素报告基因系统在HepG2 细胞表达的MⅪ实验研究 专业名称：影像医学与核医学 硕士研究生：刘壮盛 指导老师：元建鹏副教授 中文摘要 研究背景 分子影像学作为一门新兴的交叉学科，近十年来在世界范围内得到了迅猛的 发展。M刚由于具有空间、时间分辨率高，无电离辐射，能同时获得解剖及生理 信息等优点，近年来成为分子影像学研究的热点。目前，已经开发的MR分子影 像对比剂主要分为两大类：磁性对比剂和MR报告基因系统。酪氨酸酶一黑色素系 统利用酪氨酸酶催化黑色素的合成，合成的黑色素与金属离子高效螯合，从而缩 短金属离子的Tl弛豫时间，造成MRITlWI上呈特征性高信号。酪氨酸酶．黑色素 报告基因系统在MR显像时无须特殊的标记，相对其它报告基因系统简单、易行。 国内外对酪氨酸酶一黑色素系统作为MR报告基因的可行性进行了较多的研究，但 是对于动态监测酪氨酸酶基因在细胞内的表达情况以及细胞内黑色素含量与MR 影像关系的研究国内外文献较少。 研究目的 1、探讨酪氨酸酶一黑色素系统作为MR报告基因的可行性。 2、在体外细胞内，初步探讨MRI对转染酪氨酸酶基因的HepG2细胞的动态监测 作用，最佳显像时间及显像的持久性。 ◇主盘撼 酪氨酸酶基因．黑色素报告基因系统的体外Mm实验研究 3、探讨转染细胞内黑色素含量与MR影像的关系。 材料和方法 l、酪氨酸酶基因重组质粒的扩增、提取 将pcDNA3．0母重组质粒导入DH5口大肠杆菌内扩增，采用Q认GEN midi pl髂midkit提取、纯化重组质粒。 2、酪氨酸酶基因转染HepG2细胞 培养液换液。将30瓶细胞随机分为6组，每组5瓶，采用阳离子脂质体法，分 别转染1099空白质粒、lgg、2鹇、599、lO鹇、2099重组质粒。 3、M砌检查 选取转染后3天、7天、14天、28天、56天5个时间点，每组细胞各收集106 个，行MRJ TlWI扫描，分别测量各组细胞团的信号强度，动态观察转染细胞的 信号变化情况。 4、转染细胞内黑色素含量的测定 与MR检查时间对应，分别取转染后3天、7天、14天、28天、56天5个时间点， 采用分光光度法定量检测转染细胞内黑色素含量，评价细胞内黑色素含量的变化 情况。 5、转染细胞内酪氨酸酶基因表达和黑色素合成的验证 录水平，M嬲son．Fontana浸银法及电镜检查验证转染细胞内黑色素的合成。 6、统计学分析 各时间点各组细胞信号强度的比较采用方差分析和LSD．t检验，细胞内黑色 素含量与TIWI信号强度的关联性分析采用Pearson积矩相关分析。统计学分析使 用SPSSl6．0软件包，p0．05认为差异有统计学意义。 勿七电 ；口木 1、转染细胞的MRI动态监测 每个时问点6组细胞间比较：各时间点空白对照组细胞团均呈低信号。第3、 Ⅱ ◇!息苎点 酪氨酸酶基因．黑色素报告基因系统的体外MRI实验研究 7天实验组细胞团随转染重组质粒量的增多，TlWI信号强度逐渐增高(唧．05)； 它每两组间均有统计学差异(po．05)；第28天空白对照组与各实验组间TIWI 信号强度差异有统计学意义(po．05)，而各实验组间均无统计学差异(po．05)； 第56天6组细胞间TlWI信号强度无统计学差异(p加．05)。 每组细胞不同时间点变化趋势：空白对照组TlWI信号强度变化趋势基本呈 第56天达最低。201tg组于第7天TlM信号强度达最高，第56天达最低。 2、转染细胞内黑色素含量的定量检测 转染后各组细胞黑色素含量随时间变化趋势：基本与TlWI信号强度相对应。 空白对照组细胞黑色素含量随时间变化趋势基本呈一条水平线。11．tg组、5119组、 201tg组于第7天黑色素含量最高；2pg组、lOpg组于第14天黑色素含量最高；第 56天各实验组细胞黑色素含量最低，与空白对照组无明显差异(p0．05)。 转染细胞内黑色素含量与TlWI信号强度呈显著正相关，Pearson相关系数 r0．946(p0．05)。 3、酪氦酸酶