秀珍菇超高压保鲜中分离的芽孢杆菌的鉴定.pdfVIP

食用菌学报@2011．18(1)：59～62 文章编号：1005—9873(2011)01—0059—04 吉仃亡 秀珍菇超同ISF-．保鲜中分离的芽孢杆菌的鉴定 许峰¨，刘 宇1，赵爽1，王贺祥2，张国庆3，王守现1，闫跃龙2，侯宇2，冯杉杉2 (1北京市农林科学院植物保护环境保护研究所，北京100097；2中国农业大学农业生物技术国家重点实验室， 北京100193；3北京农学院生物技术学院，农业部都市农业(北方)重点实验室，北京102206) 摘 要：从秀珍菇超高压保鲜的包装袋中分离获得WMl002菌株，以其基因组为模板扩增获得该菌株的16S rRNA基因的序列，结果表明：该菌株与芽孢杆菌属菌株的基因序列同源性较高，GenBank登录号为 velezensisCR．502、B．vallismortis JCM9070的 DSMll031、B．methylotrophicusCBMB205和B．atrophaeus 遗传距离最近，相似性均达到99．8％，因此将菌株WMl002鉴定为Bacillussp．。 rRNA 关键词：秀珍菇；芽孢杆菌；16S 秀珍菇(Pleurotus 内蒙古包头科发有限公司)中进行处理，压力为 geesterani)隶属于担子 600 MPa，时间60min，具体步骤同文献[4]，由中 菌门(Basidiomycota)，层菌纲(Hymeno． 国农业大学食品科学与营养工程学院完成。 mycetes)，伞菌目(Agaricales)，侧耳科 (Pleurotaceae)，侧耳属(Pleurotus)LlJ。该菇味1．4菌株获得 道鲜美、营养丰富，深受消费者青睐[2]，保鲜问题 在超高压处理的秀珍菇包装袋中分离获得 对其产业发展至关重要。超高压技术是目前国 一株细菌，命名为WMl002，分离方法同文献 际上最热门的食品保鲜技术之一[3]，笔者在应用 [5]，由中国农业大学农业生物技术国家重点实 该项技术时，从秀珍菇包装袋中分离纯化获得一 验室完成。 个细菌菌株，本研究拟通过基于16SrRNA序列1．516SrRNA分子鉴定 构建系统发育树，对该菌株进行鉴定，旨在为秀 1．5．1基因组DNA的提取 珍菇超高压保鲜技术中微生物的灭菌提供参考。 将分离菌株WMl002接种于LB液体培养 基中，具体培养方法同参考文献I-6]。之后，取 1材料与方法 2mL菌液提取基因组DNA，具体步骤同参考文 1．1材料 献[7]。 1．5．2PCR扩增 秀珍菇(P．geesterani)子实体购自北京新 发地农产品中心批发市场。 利用16SrRNA基因的通用引物P1(57． 1．2培养基 LB液体培养基(／L)：胰蛋白胨10 P6(5 g，NaCl 10 7．0。 CCCC一37)[8]进行PCR扩增。 g，酵母粉5g，pH x LB固体培养基(／L)：LB液体培养基中加入 10 PCR