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Western blot 实验技术;定义：;Western Blot基本原理;Western Blot一般流程;通过有机溶剂或水溶法制备总蛋白 水溶液提取法 针对水、稀盐、稀酸或碱溶液中的蛋白质。稀盐和缓冲系统的水溶液 对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂 。 细胞裂解液： 0.5ml水+0.5ml裂解液+10μl蛋白酶抑制剂+ 10μl 泛酸钠+ 1μl pepstain 有机溶剂提取法 对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括乙醇、 丙酮和丁醇等。 通过层析或电洗脱法制备目的蛋白 ;细胞数量达5×106个时就可以做WB。 将细胞裂解液再离心，收集上清液 测蛋白浓度（Bca法）,统一上样量 加loading BUFFER 煮样5min-10min ;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;纯净水（ddH2O） 丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺 ?? （Arc-Bis） SDS Tris-HCL 四甲基乙二胺(TEMED)（催化硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺和双丙烯酰胺的聚合） 过硫酸铵(APS)（提供引发丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合的自由基） ;;凝胶浓度与蛋白分离范围;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳注意事项：;转膜;膜的选择;转膜;转膜注意事项（一）;转膜的注意事项（二）;封闭（1h）(封闭时间过短会导致背景过深 );一抗、二抗孵育;显色反应;抗体保存注意事项：;Western Blot常见问题分析;SDS电泳;条带比正常的窄？ “微笑”或“倒微笑”条带？;转膜及抗体检测;背景太高