水产动物育种学 第频倪章 细胞融合与核移植.pptVIP

水产动物育种学;第七章 细胞融合与核移植;细胞融合又称体细胞杂交或超性杂交。 细胞融合－－在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个 杂种细胞的现象。包括： 1.精子和卵子的融合 2.正常情况下不能进行有性杂交的 异种细胞，融合成杂种细胞 （hybrid cell）。;细胞融合是六十年代发展起来的一门技术，属于细胞工程学的一个分支，为体细胞遗传学的发展开辟了道路。应用细胞融合技术，可以跨越杂交的障碍，结合不同种的优良性状。;;;;二、融合细胞的筛选与鉴定;;三、细胞融合技术的应用;;;动物育种： ;; 鱼类细胞融合技术在遗传育种、培育新品种方面具有广阔的应用前景；也逐渐成为生物技术和细胞工程中的热点，构建杂交瘤细胞制备单克隆抗体，在鱼病的诊断和治疗方面都很有意义。;第二节　细胞核移植;;;一、鱼类细胞核移植;;二、鱼类核移植方法;;受精后已发育到高囊胚或低囊胚的鱼卵去膜后，置于底部涂有琼脂，并盛有Holtfreter氏液的培育皿中，置于解剖显微镜下，用玻璃针\发圈切下位于动物性极的囊胚细胞团，这些细胞在2－3分钟内能分散成游离细胞。 如果细胞暂时分不开，可用一支细吸管吸水后轻轻冲击它们，以帮助细胞分离。;移核前，鱼卵需先去膜。最常用的方法是用磨尖的不锈钢镊子在解剖镜下剥开卵膜，游离出卵子。 剥膜应于排卵后2－3分钟，在盛有消毒水的培育皿中进行。 剥粘性卵时，一般只需一手持镊，用镊尖夹住卵膜的一处，迅速把膜撕裂，裂口越大越好； 剥浮性卵时，卵膜吸水后膨胀，卵周隙很大，所以可用双手持镊，同时夹住卵膜上的一处，迅速把卵膜向外撕裂。 也可用Holtfreter氏溶液配 制的0.25－0.5%胰蛋白酶液 软化卵膜，并在换液过程中 辅于轻微的摇动，这样可使 卵子从中脱出。;用极细的玻璃微针挑去核。 也有人认为，受体卵可不去核，单倍体核会在移核手术后的发育过程被排斥掉。; 将分离的的囊胚细胞立即用吸管移至盛有去核卵的培育皿中内备用。移核时，把盛有去核卵和分离细胞的培养皿置于解剖显微镜下，用发圈将它们拨到视野内，然后将操纵台移近解剖显微镜的一侧，调节移动上的位移旋钮和微型吸管的角度，使之对准分离的囊胚细胞，轻轻向后旋动注射器上的微分筒，该细胞随培养液被吸入管内破裂，但细胞质不能分散，应仍紧包围着其中的细胞核，否则细胞核直接与液体接触会受损伤。细胞被吸入管内的位置，以刚进行管口一小段距离为宜，以免将它注入卵时带入过多的培养液。 ;Removal of the nucleus surrounded by a small amount of ooplasm from a mouse germinal vesicle oocyte.;;A grafted oocyte (couplet of a karyoplast and cytoplast) aligned between two microelectrodes.;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;核移植操作系统; 鱼类核移植杂种细胞由于卵外胶膜被破坏，需在等渗的Holtfreter液中培养一段时间，然后逐渐转入低渗溶液，早期胚胎发育过后可入曝气水中培养。 ;三、细胞核移植技术的应用;1.培育新品种——获得核质杂种;;颖鲤;;2.冲破远缘杂交难以进行和杂交后代不育的屏障;3.保持并复制优良个体的基因型;4.产生雄核纯合二倍体;普通泥鳅的雄核二倍体;5.基础研究;