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第4章 蛋白质共价结的构
第4章 蛋白质的共价结构;1 蛋白质通论;1.2 构象和组织层次;;
结构层次:
一级结构 (1°) (primary structure)
二级结构 (2°) (secondary structure)
超二级结构 (supersecondary structure)
结构域 (structural domain)
三级结构 (3°) (tertiary structure)
四级结构 (4°) (quarternary structure);各个结构层次之间的关系可以作下列表示:
一级结构→二级结构→超二级结构→ 结构域→三级结构→四级结构;1.3 蛋白质功能的多样性;荧光素酶;血红蛋白(氧转运蛋白);角蛋白;2 蛋白质的一级结构;
;肽键:反式构型;二肽
三肽
四肽 ;肽链:氨基酸通过肽键连接起来而形成的链。;肽单位;2.2 肽的化学性质
双缩脲反应:肽和蛋白质特有的。
含有两个或两个以上的肽键化合物与CuSO4碱性溶液生成紫红色或蓝紫色的复合物。
用分光光度计测定蛋白质含量。;2.3 天然存在的活性肽;① 多肽激素 ;② 多肽抗菌素;?
L-Leu-D-Phe-L-Pro-L-Val
? ?
L-Orn L-Orn
? ?
L-Val-L-Pro-D-Phe-L-Leu
?
短杆菌肽S(环十肽)
?由细菌分泌的多肽,有时也都含有D-氨基酸和一些非蛋白氨基酸。如鸟氨酸(Ornithine, 缩写为 Orn)。 ; +H3N-Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-COO-
Met-脑啡肽;与真核生物的RNA聚合酶??和???牢固结合;
CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOH;3 蛋白质一级结构的测定;Sanger于1953年第一个测定氨基酸序列
---牛胰岛素(insulin)
(获1958年诺贝尔化学奖)
DNFB(2,4-二硝基氟苯)—— N末端;
蛋白质的N-末端或C-末端残基的摩尔数和蛋白质的相对分子质量;3.2 拆分蛋白质的多肽链和断开多肽链内的二硫桥;Evaluation only.
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Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;水解破坏肽健;Evaluation only.
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Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;3.4 N末端和C末端氨基酸残基的鉴定;DNFB;DNFB;② 丹磺酰氯法(DNS法) ;③ 苯异硫氰酸(酯)法(PITC法、Edman降解法 ) ;特点:剩下的肽链仍是完整的。;每次只从蛋白质的N端解离和鉴定一个aa残基;④ 氨肽酶法 ;(2) C末端
①还原法
②肼解法
③ 羧肽酶法
;C末端氨基酸;② 肼解法;③ 羧肽酶法 ;3.5 多肽链的部分裂解和肽段混合物的分离纯化; 溴化氰(CNBr):只断裂Met的羧基形成的肽健;Evaluation only.
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Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;3.6 肽段氨基酸序列的测定;Evaluation only.
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Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;;多用两种水解方法降解,得到两套肽段,经两套肽段序列的重叠拼接得到整个肽链全长序列。
;氨基末端残基 H 羧基末端残基 S;溴化氰;3.8 二硫桥位置的确定
胃蛋白酶水解
(专一性低,切点多;作用pH(~2)防止二硫键发生交换反应)
Brown及Hartlay的对角线电泳技术
(过甲酸断裂二硫键);4
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