用壳聚糖固定化纤维素酶的分析研究.pdf

Z 79磊272 用壳聚糖固定化纤维素酶的研究 摘要 维素的一组酶系的总称，它是由内切葡萄糖苷酶、外切葡萄糖苷酶和纤维‘ 糖酶三类不同催化反应功能的酶组成，只有在这三类酶的协同作用下，最终 才能把纤维素分子降解成葡萄糖。大多数纤维素酶都有一个或多个催化结构 peptide)所连接， 域和纤维素结合区，中问由一段可辨认的连接肽(1inker 只有少数微生物和高等植物产生的纤维素酶不具有这类结构域。 壳聚糖是甲壳素经化学法和酶法脱乙酰处理的产物，是由占大部分D一氨基 葡萄糖和少量的N一乙酰一D一氨基葡萄糖B一(1，4)糖苷键连接起来的直链多糖， 化学名为(1，4)一2一氨基一2一脱氧一B—D-葡萄糖，结构类似于纤维素。经过脱 乙酰化处理生成的壳聚糖大分子中存在大量的游离氨基，使其溶解性能大大 改观，由于壳聚糖所特有的各种生理活性和功能性质，使其在保健食品、生 物医药、日用化妆品、医疗诊断和生物生理等方面具有独特的应用价值。 固定化酶是20世纪60年代开始发展起来的一项新技术产物，是指经物理或 化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作 用的酶制剂，也曾叫过水不溶酶。目前已建立的固定化方法分为载体结合法、 包埋法及交联法三类。它比游离酶具有多方面的技术优点，正在被人们所接 受并逐步应用于我国的国民经济建设中。 本文用壳聚糖作为载体、戊二醛作为交联剂来固定化纤维索酶。试验发现 交联剂的最佳交联浓度为5％。以圃定化pH值、壳聚糖与酶的比例、戊二醛处 理时间为三因素，做三因素i水·F试验。通过L。(34)正交试验设计进行优化 试验，采I【{jDPS数据处理系统软件处理数据，结果显示用该方案来固定化纤维 素酶足可行的，并且固定化效率最高为69．12％，最佳条件为固定化pH值为8、 物料比为1：0．03、处理时问为12小时。 通过对固定化前后酶的动力学分析，发现固定化酶的最适温度由50℃升 高到60-80。C，这表明纤维素酶经壳聚糖固定化之后，对热的稳定性明显提高； 同定化酶的最适pH比原酶要低，往酸性方向移，且在弱酸性范围内受pH的 影响较小：表观米氏常数由8．996×10。3g／]减小到2．3×10g／1，表明该纤 维素酶经蟛定化后，与底物的亲和力有所增加。半衰期为35天左右。 关键词纤维素酶，壳聚糖，固定化，酶动力学，表观米氏常数 STUDYONCHfTOSAN—IMMOBILLIZEDCELLULASE ABSTRACT Celluloseisoneofthe resourceson with reproducible theearth the ofthe of amount．Cellulaseismade largest up end091ucanase． havedifferent function． ex091ucanase，andeellobiase．They katalysis Underthe effectof is thethree cellulose synergetic enzymes，the into of are ofone eellulasesmade