彩鲫Ran基因全长cDNA的克隆及其组织表达特异性分析.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 2003，Jun．24 (3)：173—179 ZoologicalResearch 彩鲫 Ran基 因全长 cDNA的克隆及其组织表达特异性分析 李常健 ，刘 军，石耀华，杨书婷 ，桂建芳 (中国科学院水生生物研究所，淡水生态与生物技术国家重点实验室，湖北 武汉 43o072) 摘要：根据 Ran的保守 区序列设计简并引物，结合 SMARTcDNA合成及 RACE．PCR技术 ，克隆到彩鲫 (Carassiusauratuscolorvariety)的Ran基因的cDNA全长，其编码区全长为648bp，编码 215个氨基酸。采用 BLAST程序在NCBI数据库中对其进行同源基因搜索 ，结果表明，其推测的编码氨基酸序列与斑马鱼和鲑鱼的 Ran基因编码的氨基酸序列的同源性分别高达98％和97％。还对其编码区全长序列进行 了原核表达 ，以经纯化 的表达蛋白免疫家兔 ，制备出了具有较高特异性的多克隆抗体。采用Westernblotting进行的组织特异性分析表 明，Ran蛋白在卵巢、精巢和肾中表达，在心 、脑、肝、脾和肌肉中不表达。本工作为采用免疫耗竭法、免疫 共沉淀、体外系统模拟等方法进一步研究鱼类 Ran基因的生理功能及分离鉴定其结合蛋 白提供了良好基础。 关键词：彩鲫；Ran；克隆；表达；抗体 中图分类号 ：Q959．468 文献标识码：A 文章编号 ：0254—5853(2003)03—0173—07 FullLength cDNA CloningandTissueExpression SpecificityofRan Genein ColorCrucianCarp LIChang—jian，LIUJun，SHIYao—hua，YANGShu—ting，GUIJian—fang (s衄 KeyLaboratoryofFreshwaterEcologyandBiotechnology，InstituteofHydrobiology． theChineseAcademyofSciences，Wuhan 430072，China) Abstract：Afull-lengthcDNAofRangenewasclonedfrom colorcruciancarp(Carassiusauratuscolorvariety)by usingSMARTcDNA synthesisandRACE．PCRwithapairofdegenerateprimersdesignedaccordingtotheconservedre． onsequenceofRangene．TheRan cDNA wasfoundtobe 1081bpinlengthwit}la67bp5’UTR and a366bp3’ UrR．Thecodingregionincluded46 8nucleotideacidsandencod ed215aminoacids．Searchinghomologousgenesbyus- ingthisnucleotidesequenceinNCBIdatabaseshowedthatthededucedaminoacidssequenceofRangeneofcolorcrucian carpshraedhishidentitywithRangenesofDanorerio(98％)andSalmosalar(97％)．Moreover。theful1．1engthse． quenceofitscodingregionwas expressedinE．coli(DE3)．T0acquiremulticlonalantibody，hteexpressedproteinwas purifiednadappliedtoimmunizerabbits．Western blottingresuhsindi