新城疫病毒NP基因不同区域及毒力的相关性.pdfVIP

乇同燕：新城疫病毒NP基因不同区域与毒力的相入任 新城疫病毒NP基因不同区域与毒力的相关性 硕士生王同燕 导师吴艳涛教授 刘秀梵教授 孝两 要 Disease 新城疫(NewcastleDisease，ND)是由新城疫病毒(NewcastleVirus， NDV)引起的对世界养禽业危害极为严重的一种烈性传染病。NDV的基因组为单 M 股、不分节段的负链RNA，基因组结构模式为：3’-NP…PF．HN．L一5’，分别编码 protein， M)，融合蛋I刍(Fusion protein，H】叼和大分子蛋白(Large 异则比较大。在基因组上，NP基因的非编码区同样属于高变区，研究发现后期 水禽的致病性明显增加。2007年我室以基因VII型NDV ZJl株为骨架，构建了 NP基因来源于Beaudette 显减弱，证明NP基因与NDV的毒力存在一定的相关性。为了鉴定NP基因上与 毒力相关的区域，本论文在ZJl株反向遗传操作的基础上，对NP基因上三个主要 区域的生物学功能进行了研究。 1．NP基因非编码区与病毒毒力的关系 参照Beaudette PCR方法 C株NP基因序列，设计两对引物，通过overlapping 利用引物两端的酶切位点Ec081I和ScaI将PCR扩增产物与中间质粒NDV7．2相 I和Xba 连，阳性质粒经Age 扬州人学硕十学f市论文 组质粒pZJl／SBNP6A。 基因非编码区6碱基的插入对病毒毒力几乎没有产生影响。 参照Beaudette C和ZJl株NP基因的序列，分别设计两对引物，通过 overlappingPER方法构建出编码区和非编码区分别来源于BC株的两个NP嵌合基 因，以嵌合NP基因替换ZJl株的相应部分，进而构建了两个新的全长cDNA克隆 rZ儿／SBNP毒力相似。表明：决定NDV毒力的区域主要位于NP基因的编码区， 而非编码区则对病毒的毒力无明显影响。 2．NP基因保守区和高变区与病毒毒力的关系 不同基因型NDVNP蛋白序列比对显示，不同毒株在整个编码区的同源性为 同毒株之间氨基酸差异比较大。为了澄清保守区和可变区与病毒毒力之间的关系， PCR方法，将rZJlNP基因中的高变区和保守区分别换成 本研究通过overlapping 病毒毒力的区域主要位于NP基因的保守区。 关键词：新城疫病毒；反向遗传：NP蛋白：毒力 千．同燕：新城疫病毒Nr基因不同区域与毒力的相关性 thedifferent betweenthevirulenceand Relationship inNewcasltediseasevirusNP regions protein M．Sc Candidate：TongyanWang Wu Supervisor：Prof．Yantao