乳糖发酵短杆菌发酵生产L-异亮氨酸控制策略的的分析研究.pdfVIP

摘 要 摘 要 L一异亮氨酸足人体必需的八种氨基酸之一，同时又是三种支链氨基酸之一，是合成 人体激素、酶类的蝣i料，具有促进蛋门质合成和抑制其分解的效果，在人体生命活动中 起着重要作jtJ[1i。L．片亮氨酸现已被广泛运于生物医药、组织工程、光化学、电化学、 食品工业、化妆tI^等领域12,3J，在国外，还将其大量用于乳牛催乳以及饲料添加剂【4J，以 及将L一异亮氨睃添JJIl到饮料中尘产功能饮料等【5j。 对L一异亮氦酸n勺发酵过程进-’j二了一系列的优化。主要研究结果如下： l 研究了溶氧埘Brevibacterium h恒700 h后调至600r／min以 响，提出了自订12 r／min以维持溶氧在35％以上，12 维持溶氧在15—20％的两阶段供氧控制模式。与对照相比，获得了较高的产率(0．094 ∥g)和糖耗速度(4．76g／L．h)，在较短时问内(56h)获得较高的Ile产量(23．3∥L)， 比单一搅拌转速(600r／min)时的产量提高了11．6％。生产强度(0．448 g／L．h)比 恒定搅拌转速(500、600、700、800r／min)控制下的过程分别提高了83．6％、28．7 ％、44．9％、35．7％。为了确定溶氧分阶段和pH分阶段相结合的控制方式是否可以 提高异亮氨酸的产量，对不同的控制模式进行了比较，结果表明，溶氧与pH相结合 7．2的控制方式更适合异亮氨酸 的控制效果并非简单加和性，溶氧分阶段与恒定pH 的生产，在52 h时产量达到23．9∥L。 2不同初始葡萄糖浓度下，细胞生长和异亮氨酸的合成具有显著差异：较高的初始葡 萄糖浓度(140g／L)可延长细胞生长持续时间，但降低了异亮氨酸对葡萄糖得率(O。131 ∥曲；较低的初始葡萄糖浓度(100g／L)能提高异亮氨酸的得率(0．148g／L)；通过分批 补料流加不同量的葡萄糖，合适的补糖(60 g／L)可以延长菌体的生长时间，提高菌体 氨酸生产强度较低；通过恒定速率流加可以有效控制菌体浓度，避免菌体生长过盛， 使最终碳流较多流向异亮氨酸产量(24．5∥L)，并得到较高得率(O．154g／曲。在上述分 析基础上，提出了恒速流加策略：当残糖浓度低于15∥L时，控制恒定流速3．33 g·L-I．h～，补糖量为60 g／L。 程各动力学参数，得到异亮氨酸分批发酵的最佳温度控制策略：在发酵初始阶段(0．12 h)发酵温度控制在31℃以维持较高的菌体生长速率和异亮氨酸合成速率；发酵中期 (13-48h)将发酵温度降到28(2以获得代谢流强化和细胞衰亡之间的最佳平衡；发酵 后期(49h后)维持26C直至发酵结束。采用这一最佳温度控制轨迹，异亮氨酸产 g／L．h)则分别提高了11．3％、 量(27．7g／L)、对葡萄糖产率(O．78g／g)矛H生产强度(0．462 2 l 1．9％jftl8．8％。并对不同温度及温度三阶段控制方式下异亮氨酸生物合成代谢网络 的通最分布进行分析，发现低温时通过TCA循环的代谢流量减少，流向副产物氨基 酸的流量增加。随着温度的升高，通过TCA循环的代谢流增加，流向副产物氨基酸 的最减少。但温度过高又会造成TCA途径的流量过大，流向L．异亮氨酸的流量减少， 导致异亮氨酸的产量不高。三阶段温度转速控制时，更多的碳通量流向EMP途径和 TCA循环，经过ASA进入Thr的碳通量也相应有所增加，直接导致了流向异亮氨酸 的碳通量的增加，进而提高了异亮氨酸的产量(提高幅度达11．3％)。 关键词：异亮氨酸，Brevibacterium