干细胞的生存和分化的微环境.docVIP

干细胞的生存和分化的微环境, 后来又发现M SC 具 有更广泛的分化潜能,M SC 可定向分化为成骨细 胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等[ 1～ 3 ]。由于M SC 取材方便, 培养简单, 有自我更新及分化功能, 在经 过20～ 30 个培养周期后仍能保持多向分化潜能, 可 携带目的基因组对成骨细胞、心肌、神经系统等受损 组织进行修复。我们用密度梯度离心分离的hM SCs 能贴壁生长, 原代细胞生长增殖较慢, 需7～ 10d; 3 ～ 10 代的细胞生长周期为3～ 4d; 10 代以后细胞生 长速度开始减慢。细胞呈均一的典型的成纤维细胞 形态, 各代之间的形态也较均一。对hM SCs 的细胞 表面标志研究表明, hM SC 贴壁附着后则均一表达 CD27、CD44、CD90等多种表面抗原表达。与文献报道 相似[ 5, 6 ]。 M SC 获取方法简单, 易体外增殖。L i 等[ 7 ]建立 大鼠大脑中动脉闭塞模型, 经纹状体内注射M SC, 28d 发现供体内M SC 在脑内存活, 能迁移到距注射 部位2. 2mm 处。其中1% 细胞表达N euN; 8% 的细 胞表达GFA P。M ahmood 等[ 8 ]采用含有脑源性神经 营养因子(BDN F) 或神经生长因子(N GF ) 的M SC 体外培养, 结果显示含有BDN F 或N GF 比未用组 在脑创伤鼠脑内存活M SC 数明显增多, 神经功能恢 复也优于后者, 两组移植存活的M SC 部分细胞表达 N euN、MA P22 和GFA P, 说明脑微环境中存在一些 能促进M SC 增殖分化的营养因子及趋化因子等, BDN F 或N GF 等能促使M SC 向神经细胞转化。上 述方法均在体内进行, 并且转化率较低, 如果能在体 外建立M SC 定向高效诱导为神经元的模型, 将对研 究神经系统细胞移植提供理想细胞来源。 我们从成人骨髓中分离得到骨髓间质干细胞, 并在体外大量扩增, 传至第5 代体外定向诱导研究 发现采用bFGF 预诱导, bFGF 及22M E 诱导4h 后, 大部分M SC 转变为神经元样细胞, 并有轴突和树突 出现, 多个神经元之间可形成网络。诱导6h 后的神 经元样细胞, 神经元标志物N SE、N F2N 表达为阳 性, 证明该细胞不仅形态学发生改变, 而且在分子水 平上也发生改变。星形胶质细胞标志物GFA P 染色 为阴性, 证明该神经元样细胞不是星形胶质细胞。而 对照组无阳性细胞出现。Woodbu ry 等[ 9 ]用222M E、 二甲基亚砜(DM SO ) 和丁化羟基苯甲醚(BHA ) 等一 些具有抗氧化的物质同样成功诱导了M SCs 转变为 神经元, 并表达神经元特有的标记如N F、N eu、tau 以及N SE 等。Sanchez2Ramo s 等[ 10 ]用表皮生长因子 (EGF) 或BDN F 与视黄酸(RA ) 等组合将M SCs 诱 导为神经元样细胞。O kabe 等[ 11 ]报道bFGF 在胚胎 干细胞分化神经细胞中起一定作用, 可能也参与 M SC 向神经元分化。22M E、二甲基亚砜、硫代甘油 诱导M SC 为神经元样细胞, 但体外存活时间短。采 用bFGF 及22M E 诱导M SCs 为神经元样细胞体外 存活时间明显延长, 这说明利用细胞因子和抗氧化 剂联合诱导优于单纯抗氧化剂诱导。这为M SCs 体 内移植广泛治疗神经系统疾病提供理论依据。M SCs 适合自体移植, 避免排异反应, 比神经干细胞移植更 有优越性, 这些证据表明M SCs 是神经系统细胞治 疗的理想载体之一。体外M SCs 定向分化为神经元 样细胞其机制、细胞功能及能否与宿主大脑整合并 长期存活有待进一步研究。 GFA P 是星形胶质细胞的特异性标志蛋白, 实验 中我们一直未发现GFA P 阳性细胞, 提示在A TRA 和MNM 诱导后,M SCs 向神经元方向分化, 而不是向 胶质细胞转化, 这与Woodbu ry 和项鹏等[ 3, 10 ] 的研究 结果一致, 但与Sanchez2Ramo s 等[ 11 ]采用维生素A、 脑源性神经营养因子和神经生长因子等细胞因子诱导 的结果不同。这可能与彼此诱导方案不同有关。 MSCs 是骨髓中的另一类干细胞,因其取材方 便,具有多向分化潜能,体内植入反应较弱,正逐渐 受到学者们的广泛关注。MSCs 可分化为成骨细 胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞和神经细胞 等[326 ] 。它可以为骨、软骨、肺、脑组织等的修复和 重建提供细胞来源。Azizi 等在研究中直接将人骨 髓基质细胞注射入鼠纹状体白质中,于5～72 d 后 检测受者鼠脑中各个部位是否存在供者源性细胞成 活、迁移、分化等。其结果证实了人MSCs