GM-CSF作为Ⅱ型登革病毒E蛋白免疫佐剂的免疫效果观察.pdfVIP

微生物学免疫学进展 2017年2月第45卷第 1期 ProginMicrobiolImmunol，Feb．2017，Vo1．45No．1 ·7 · · 论 著 · GM—CSF作为 II型登革病毒 E蛋白免疫佐剂 的免疫效果观察 崔晓云，房树玉，范东瀛，吴艳花，安静 首都医科大学基础医学院微生物学教研室，北京 100069 摘要：目的 观察粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子 (granulocyte—macrophagecolonystimulatingfactor，GM—CSF)作为 II 型登革病毒E蛋白免疫佐剂的保护效果，评估 GM—CSF作为蛋白疫苗免疫佐剂的可行性。方法 提取 GM—CSF质 粒 (pCAG—GM)、将表达 II型登革病毒 E蛋白的重组质粒(E／pGEX一6P一1)进行诱导，表达产物用亲和层析纯化。将 BALB／c小鼠随机分为E蛋 白组 、佐剂组 (E蛋白+GM-CSF)和对照组进行免疫，采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检 测血清抗体终点效价；采用蚀斑减少中和试验 (PRNT)检测II型登革病毒中和抗体水平；酶联免疫斑点试验 (ELIS— POT)检测小鼠免疫后细胞因子的水平 ；用攻毒试验观察各组小 鼠保护率。结果 E蛋白组和佐剂组小鼠血清中抗 体终点效价、中和抗体水平均在免疫后有一定的升高，差异无统计学意义(P0．05)；佐剂组细胞因子(IFN—和IL一 10)水平较E蛋白组均有明显上升，差异具有统计学意义(P0．05)；但攻毒试验显示，佐剂组小鼠全部死亡，生存 率为0，而E蛋白组的小鼠保护率为33％。结论 GM-CSF免疫佐剂可抑制II型登革病毒E蛋白的免疫保护作用， 其作为蛋白疫苗免疫佐剂仍需慎重。 关键词：登革病毒 ；E蛋白；粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；佐剂；免疫效果 中图分类号：R373．9 文献标志码：A 文章编号：1005—5673(2017)01-0007—06 DoI：10．13309／j．cnki．pmi．2017．01．002 ObservationonGM -CSFeffectin immunization withdenguevirustype2E protein CUIXiao—yun。FANGShu-yu，FANDong—ying-WUYan—hua，ANJing DepartmentofMicrobiology，SchoolofBasicMedcialSciences，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China Correspondingauthor：WU Yah—hurt-E—mail：wuyanhua@ccmu．edu．ca Abstract：Objective ToobserveandevaluatetheeffectofGM—CSFasapotentialadjuvantinimmunizationwithtype2 denguevirus(DV2)Eprotein．Methods TheGM ·CSFplasmidwasextractedandrecombinantEproteinwasinduced， theexpressedrecombinantEproteinwaspurifiedbyusingaffinitychromatography．Theexperimentalmiceweredividedinto threegroupsincludingEproteingroup，adjuvantrgoup(Eprotein+GM—CSF)andcontrolgroup．ELISAandPRNTwere usedindetectionoftheIgGlevelsforanti—